生物采樣箱
供化驗用的水樣必須有足夠的代表性。從水樣取出後,到分析結束之前,應盡量避免水中原有成分發生明顯變化。避免外來污染,這是水質調查工作中十分重要的一環。如果所取水樣沒有代表性,或者成分已經發生了變化,後面的工作做得再好,也得不到正確的結果,有問題也不易查出來,因此必須注意水樣的採集與保存。
一、采樣計劃
采樣前應根據水質檢驗目的和任務制定采樣計劃,內容包括:采樣目的、檢驗指標、采樣時間、采樣地點、采樣方法、采樣頻率、采樣數量、采樣容器與清洗、采樣體積、樣品保存方法、樣品標簽、現場測定項目、采樣質量控制、運輸工具和條件等。
二、采樣容器
1、應根據待測組分的特性選擇合適的采樣容器。
2、容器的材質應化學穩定性強,且不應與水樣中組分發生反應,容器壁不應吸收或吸附待測組分。
3、采樣容器應可適應環境溫度的變化,抗震性能強。
4、采樣容器的大小、形狀和重量應適宜,能嚴密封口,並容易打開,且易清洗。
5、應盡量選用細口容器,容器的蓋和塞的材料應與容器材料統一。在特殊情況下需用軟木塞或橡膠塞時應用穩定的金屬箔或聚乙烯薄膜包裹,最好有蠟封。有機物和某些微生物檢測用的樣品容器不能用橡膠塞,鹼性的液體樣品不能用玻璃塞。
6、對無機物、金屬和放射性元素測定水樣應使用有機材質的采樣容器,如聚乙烯塑料容器等。
7、對有機物和微生物學指標測定水樣應使用玻璃材質的采樣容器。
8、特殊項目測定的水樣可選用其他化學惰性材料材質的容器。如熱敏物質應選用熱吸收玻璃容器;溫度高、壓力大的樣品或含痕量有機物的樣品應選用不銹鋼容器;生物(含藻類)樣品應選用不透明的非活性玻璃容器,並存放陰暗處;光敏性物質應選用棕色或深色的容器。
三、采樣容器的洗滌
1、測定一般理化指標采樣容器的洗滌
將容器用水和洗滌劑清洗,除去灰塵、油垢後用自來水沖洗干凈,然後用質量分數10%的硝酸(或鹽酸)浸泡8h,取出瀝干後用自來水沖洗3次,並用蒸餾水充分淋洗干凈。
2、測定有機物指標采樣容器的洗滌
用重鉻酸鉀洗液浸泡24 h,然後用自來水沖洗干凈,用蒸餾水淋洗後置烘箱內180℃烘4h,冷卻後再用純化過的己烷、石油醚沖洗數次。
3、測定微生物學指標采樣容器的洗滌和滅菌
(1)容器洗滌:將容器用自來水和洗滌劑洗滌,並用自來水徹底沖洗後用質量分數為10%的鹽酸溶液浸泡過夜,然後依次用自來水,蒸餾水洗凈。
(2)容器滅菌:熱力滅菌是最可靠且普遍應用的方法。熱力滅菌分乾熱和高壓蒸氣滅菌兩種。乾熱滅菌要求160℃下維持2h;高壓蒸氣滅菌要求121℃下維持15 min,高壓蒸汽滅菌後的容器如不立即使用,應於60℃將瓶內冷凝水烘乾。滅菌後的容器應在2周內使用。
四、采樣器
1、采樣前應選擇適宜的采樣器。
2、塑料或玻璃材質的采樣器及用於采樣的橡膠管和乳膠管要洗凈備用。
3、金屬材質的采樣器,應先用洗滌劑清除油垢,再用自來水沖洗干凈後晾乾備用。
4、特殊來樣器的清洗方法可參照儀器說明書。
五、水樣採集
1、一般要求
(1)理化指標
采樣前應先用水樣盪洗采樣器、容器和塞子2~3次(油類除外)。
(2)微生物學指標
同一水源、同一時間採集幾類檢測指標的水樣時,應先採集供微生物學指標檢測的水樣。采樣時應直接採集,不得用水樣測洗已滅菌的采樣瓶,並避免手指和其他物品對瓶口的沾污。
(3)注意事項
a 采樣時不可攪動水底的沉積物。
b 採集測定油類的水樣時,應在水面至水面下300 mm採集柱狀水樣,全部用於測定。不能用採集的水樣沖洗采樣器(瓶)。
c 採集測定溶解氧、生化需氧量和有機污染物的水樣時應注滿容器,上部不留空間,並採用水封。
d 含有可沉降性固體(如泥沙等)的水樣,應分離除去沉積物。分離方法為:將所采水樣搖勻後倒人筒形玻璃容器(如量筒),靜置30 min,將已不含沉降性固體但含有懸浮性固體的水樣移人采樣容器並加人保存劑。測定總懸浮物和油類的水樣除外。需要分別測定懸浮物和水中所含組分時,應在現場將水樣經0. 45µm膜過濾後,分別加人固定劑保存。
e 測定油類、BOD5、硫化物、微生物學、放射性等項目要單獨采樣。
f 完成現場測定的水樣,不能帶回實驗室供其他指標測定使用。
❷ 浮游生物采樣器有哪些類型
浮游生物采樣源器主要包括浮游生物網、浮游生物連續記錄器和浮游生物泵等。浮游生物網可分為簡單式浮游生物網和復合式浮游生物網兩類。世界上第一個簡單式浮游生物網是1828年研製出來的,用來捕捉小蟹和藤壺幼蟲。
簡單式浮游生物網由網口、網衣、網底取樣瓶、桶和囊袋構成。網口由邊框支撐,呈圓形、三角形或長方形等形狀;網衣與網口連接,網眼大小規格很多,可根據採集對象的大小加以選用。網底取樣瓶附在網衣末端,用以收集網中的浮游生物樣品。
復合式浮游生物網是在網架上裝配若干個網,可同時採集不同水層中的浮游生物樣品。先進的復合式網配備有環境監測儀器,用電子計算機處理資料,顯示環境參數和網位深度、網濾水量等數據。採集器主要由水雷形管子、篩絹、卷軸、潛水板、齒輪箱、福爾馬林池等部分組成,通過管內緩緩卷動的篩絹不斷過濾進入儀器中的海水,得到浮游生物樣品。浮游生物泵是抽取海水的離心泵,抽取的海水經篩選過濾便可得到浮游生物樣品。
❸ 環境微生物測序采樣指南
隨著高通量測序技術飛速發展,人們對微生物的認知也在逐漸深入。凌恩生物每天都會接到全國各類型微生物測序樣本,上到山巔土壤,下至深海底泥;有老師研究植物根際和葉內微生物,也有老師關注動物昆蟲腸道生理代謝的奧秘。為了得到能夠研究的測序結果,規范標準的取樣及送樣是成功的前提。
在樣本送測前,我們要注意以下幾點:
1、取樣使用的工具及容器必須經過滅菌處理;
2、取樣後及時做好標記,記錄取樣相關信息;
3、樣本送測前做好備份,防止意外發生丟失珍貴樣本;
4、送測樣本使用標准容器承裝,在容器上標記清晰,送樣不宜過多;
5、寄送時保持低溫環境,建議使用乾冰配送;
6、可使用凌恩微生態樣本保真液,高品質樣本是決定高品質研究成果的第一步。
常規土壤類樣本取樣方法-農田/森林/草原土壤等
(1) 取樣方法
按實驗設計確定采樣范圍,取樣器具需事先消毒滅菌處理。采樣時應去除地表雜質,根據需要挖取相應深度(如5~20 cm)的土壤,置於冰磨拍掘上運至實驗室。去除可見雜質,建議過2 mm無菌篩網。同一樣方多點樣本等量混合均勻後取5~10 g,保存無菌EP管中,進行核酸提取,或-80℃保存備用。若不能自行提取,可置於乾冰寄送至公司。
註:建議戴一次瞎核性手套、口罩,進行嚴格賀敬取樣和操作,盡可能減少人為的污染。
根際土壤樣本取樣方法-作物/蔬菜/草木根系等
(1)作物類(含草地等矮小植物)根際土壤取樣方法
a. 採集植物植株,去除根部大塊土壤,置於冰上運輸至實驗室;
b. 晃動根部,去除根部鬆散的土壤後,使用無菌刷子從根部收集殘留土壤;
c. 同一樣方多點取樣土壤樣本等量混合均勻後,液氮速凍,置於-80℃冰箱保存。
(2)林木類根際土壤取樣方法
a. 採集地面下 10-20 cm 根際土壤,置於冰上運輸至實驗室;
b. 過 2-5 mm 孔徑無菌篩網;
c. 同一樣方多點取樣土壤樣本等量混合均勻後,液氮速凍,置於-80℃冰箱保存。
若不能自行提取,可置於乾冰寄送至公司提取。
註:取樣器具請事先消毒滅菌處理。若為真菌根際土壤,請務必盡可能去除菌絲體殘留,減少對 DNA/RNA 提取的干擾。
植物表面微生物取樣方法
(1)取樣方法
依據實驗設計,進行樣方設置,每一樣方進行多點取樣,同一樣方點等量混勻成一個樣本。植物根部組織可以通過搖晃振盪或無菌刷子去除根表粘附土壤。
(2)樣本前處理
將植物組織浸沒於無菌PBS溶液,180rpm孵育20min;取出植物組織,再次加入無菌PBS溶液,180rpm孵育20min,取出植物組織,再次加入無菌PBS溶液,超聲波洗滌10min(參數:160 W,30s/30s),最後取出植物組織至於-80度冰箱保存備用。
將三次洗滌液匯總,過0.2um濾膜(或12000g離心10min,收集沉澱),收集濾膜至於-80度冰箱保存。
植物內部微生物取樣方法
(1)依據實驗設計,進行樣方設置,每一樣方進行多點取樣,同一樣方點等量混勻成一個樣本。
(2)對植物組織進行表面消毒操作或者使用上一步「 植物表面微生物取樣」中處理過的植物組織,液氮速凍後,研磨成粉,即可用來進行核酸的提取。
植物組織表面消毒具體操作如下:
無菌水洗滌30s,70%無菌乙醇洗滌2min,2,5% NaClO(含0.1% Tween 80)浸泡5min後轉移至70%無菌乙醇浸泡30s,最後使用無菌水洗滌植物組織3次,即視為對植物組織表面進行無菌化。
表面無菌化的植物組織至於-80度冰箱保存備用或進行核酸提取。
植物根表面微生物取樣方法
(1)將所研究的物體放在事先滅好的無菌容器當中;
(2)加入PBS緩沖液後進行振盪,使得微生物從物體表面充分的脫落並聚集在PBS緩沖液當中,震盪至少2h以上;
(3)直接提取PBS緩沖液中的微生物或者將緩沖液用濾膜過濾之後再進行DNA的提取。
PBS濃度和PH有要求:濃度是用1x的,PH值是7.4,一般買回來的PBS是10x的,建議稀釋到1x。
注意: 建議優先使用超聲波洗滌 。
空氣樣本微生物取樣方法
使用空氣抽濾機,使空氣通過 0.22 μm 濾膜,濾膜上有可見覆蓋物(過濾時間越長,收集的空氣中的灰塵越多,菌數量越多),收集完成後取下濾膜。濾膜置於凍存管中,液氮速凍,乾冰寄送到實驗室。
注意:由於樣本特殊,微生物含量較少,建議多保管備份保存。
水體樣本微生物取樣方法
送樣量:擴增子直徑3-4cm濾膜1-2張;宏基因組直徑3-4cm濾膜>=2張;
(1)研究目的進行確定水體的取樣深度和范圍;
(2)采樣後進行濾膜過濾,選擇合適孔徑的濾膜,對於澄清水體或者略渾濁水體,選用0.22μm或者0.45μm的濾膜,取樣體積大於5L;對於渾濁水體,建議先用大孔徑的濾膜過濾一遍,再用小孔徑的濾膜過濾;
(3)水體泥樣的採集提供大於5g樣本;
(4)用大體積乾冰運輸,且要保證我方在收到樣品開箱檢驗時有足夠的乾冰剩餘。
注意:擴增子項目將2-3L水體過濾到1-2張濾膜(0.22或0.45um)後裝入到離心管中;宏基因組項目將10L水體過濾到>=2張濾膜(0.22或0.45um)後裝入到離心管中。
活性污泥與水體/地表沉積物類樣本取樣方法
(1)活性污泥
從活性污泥裝置中取大於10 ml的懸浮污泥樣本(約5-10 g沉降物),保存無菌EP管中,放入液氮或置於冰上,立即運至實驗室進行核酸提取,或-80℃保存備用。
註:若液態污泥樣本沉降物較少,可適當增加取樣量。
(2)水體/地表沉積物
取距離水底/地表0-10 cm(具體按實驗需要而定)的沉積物5~10 g,保存無菌取樣袋或EP管中,置於冰上運送至實驗室進行核酸提取,或-80℃保存備用。若不能自行提取,可置於乾冰寄送至公司提取。
❹ gmp認證微生物擦拭取樣為什麼用滅菌生理鹽水
微生物快速檢測采樣箱使用說明(采樣,樣本,容器,滅菌,微生物,無菌,生理鹽水,使用說明)
一、實驗前的准備工作以及操作中的注意事項
1.樣品稀釋均質罐(225ml聚四氟乙烯塑料罐)、玻璃器皿等的消毒:清洗潔凈後,加入經過煮沸的生理鹽水225 ml(至有刻度處),蓋上蓋子後放入高壓鍋或紅外線消毒櫃(在特殊情況下,可以使用民用紅外線消毒櫃)中消毒。
2.生理鹽水的配置與滅菌:取9g分析純NaCl溶解到1000mL蒸餾水或純凈水中,取9ml加入到10mL潔凈試管中,蓋上硅橡膠塞或棉紗塞,放入紅外線消毒櫃中消毒。
3.移液器管頭的消毒:將管頭放入錫箔袋或用錫箔紙包好,放入民用紅外線消毒櫃中消毒。
4.消毒效果觀察:按照菌落總數的快速測定方法做空白樣品實驗,觀察器皿消毒效果是否良好。
5.操作前的消毒與操作中的無菌概念:
5.1在適宜的環境中,點燃酒精燈,營造局部無菌環境的。
5.2用75%酒精棉球將手和樣品開口處周圍抹擦消毒。
5.3操作工具如鑷子、剪子、長柄勺、小刀等,在酒精燈上用火焰消毒後使用。
5.4取樣和加樣時盡量靠近酒精燈操作。
5.5根據不同的檢測項目,採用消毒過的器皿,按檢測方法說明要求進行取樣、稀釋、紙片加樣和培養,並定時觀察結果。
6.對於超標或陽性結果的樣品,有條件時,應採用國家標准檢驗方法進行確認。
BX-2型 攜帶型培養箱
二、采樣
(一)采樣原則
1.代表性原則:採集的樣品能真正反映被采樣本的總體水平,也就是通過對具體代表性樣本的監測能客觀推測食品的質量。
2. 典型性原則:採集能充分說明達到監測目的典型樣本,包括污染或懷疑污染的食品、摻假或懷疑摻假的食品、中毒或懷疑中毒的食品等。
3. 適時性原則:因為不少被檢物質總是隨時間發生變化的,為了保證得到正確結論應盡快檢測。
4 .適量性原則:樣品採集數量應滿足檢驗要求,同時不應造成浪費。
5.不污染原則:所採集樣品應盡可能保持食品原有的品質及包裝型態。所採集的樣品不得摻入防腐劑、不得被其他物質或致病因素所污染。
6. 無菌原則:對於需要進行微生物項目檢測的樣品,采樣必須符合無菌操作的要求,一件采樣器具只能盛裝一個樣品,防止交叉污染。並注意樣品的冷藏運輸與保存。
7. 程序原則:采樣、送檢、留樣和出具報告均按規定的程序進行,各階段均應有完整的手續,交接清楚。
8.同一原則:採集樣品時,檢測及留樣、復檢應為同一份樣品,即同一單位、同一品牌、同一規格、同一生產日期、同一批號。
(二)采樣數量
1.根據檢測項目來確定采樣量,既要滿足檢測項目要求,又要滿足產品確認及復檢的需要量。
2. 微生物檢測用樣品采樣數量:
❺ 厭氧微生物采樣的時候應注意什麼
厭氧菌的培養方法
厭氧菌在有氧的情況下不能生長.要培養厭氧菌,必須創造一個無氧的環境.通常用培養基中加入還原劑,或用物理、化學方法去除環境中的游離氧,以降低氧化還原電勢.如皰肉培養基、硫基乙酸鈉培養基,牛心腦浸液培養基等.常用的厭氧培養方法有許多,可根據實際情況選用.
1.厭氧缸法接種好標本的平板或液體培養基試管,可放入厭氧缸內培養,厭氧缸是普通的乾燥缸,用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境,從而將厭氧菌培養出來.
2.厭氧袋(Bio-bag)即在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌.塑料袋透明而不透氣,內裝氣體發生管(有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、乾燥劑.放入已接種好的平板後,盡量擠出袋內空氣,然後密封袋口.先折斷氣體發生管,後折斷美蘭指示劑管,命名袋內在半小時內造成無氣環境.如不突變表示袋內已達厭氧狀態,可以孵育.
3.厭氧手套箱(Anaerobie glove box)是迄今為止國際上公認的培養厭氧菌最佳儀器之一.它是一個密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內進行操作,故名.箱側有一交換室,具有內外二門,內門通箱內先關著.欲放物入箱,先打開外門,放入交換室,關上外門進行抽氣和換氣(H2,CO2,N2)達到厭氧狀態,然後手伸入手套把交換室內門打開,將物品移入箱內,關上內門.箱內保持厭氧狀態,也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理.該箱可調節溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內,還可放入解剖顯微鏡便於觀察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適於作厭氧細菌的大量培養研究,大量培養基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗.金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環境和溫度等均系自動調節.
4.厭氧盒:原理同厭氧袋,有成品銷售.
5.生物耗氧法:在一密閉的容器內放以生物(多是植物),消耗氧氣,同時產生二氧化碳,供細菌生長用.我沒見過.
6.焦性末食子酸法:在一潔凈的玻片上鋪上紗布或濾紙,均勻撒上焦性末食子酸,然後再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速將已接種細菌的平板倒扣在上面,用融化的白蠟封邊,造成一個封閉空間.焦性末食子酸與鹼反應後耗氧.該法用於厭氧不嚴格的厭氧菌的培養,簡單.如有梭狀芽孢桿菌.
7.皰肉培養基:本身就是一個不需特殊設備的厭氧培養法.皰肉和肉湯裝入大試管,液面封凡士林,造成無氧環境.
❻ 在食品微生物檢驗中,對樣品的採集方案有哪些要求
食品衛生微生物檢驗樣品的採集和處理
一、范圍
適用於各類食品樣品的采樣。
二、采樣用品
滅菌探子、鏟子、匙、采樣器、試管、吸管、廣口瓶、剪子、開罐器等。
三、樣品的採集
在食品檢驗中,所採集的樣品必須有代表性。食品中因其加工批號、原料情況(來源、種類、地區、季節等)、加工方法、運輸、保藏條件、銷售中的各個環節(例如有無防蠅、防污染、防蟑螂及防鼠等設備)及銷售人員的責任心和衛生認識水平等均可影響食品衛生質量,因此必須考慮周密。
1、采樣數量
每批樣品要在容器的不同部位採取,一般定型包裝食品採取一袋/瓶(不少於250g)及散裝食品採取250g.
2、采樣方法
(1)
采樣必須在無菌操作下進行。
(2)
根據樣品種類,袋裝、瓶裝和罐裝食品,應采完整的未開封的樣品。如果樣品很大,則需要無菌采樣器
取樣;固體粉末樣品,應邊取邊混合;液體樣品通過振搖混勻;冷凍食品應保持冷凍狀態(可放在冰內、冰箱的冷盒內或低溫冰箱內保存),非冷凍食品需在1℃~5℃中保存。
3、
采樣標簽
采樣前或後應貼上標簽,每件樣品必須標記清楚(如品名、來源、數量、采樣地點、采樣人及采樣時間等)。
四、送檢
樣品送到微生物檢驗室應越快越好。如果路途遙遠,可將不需冷凍樣品保持在1℃~5℃環境中(如冰壺)。如需保持冷凍狀態,則需保存在泡沫塑料隔熱箱內(箱內有乾冰可維持在0℃以下)。送檢時,必須認真填寫申請單,以供檢驗人員參考。
五、檢驗
微生物檢驗室接到送檢申請單,應立即登記,填寫實驗序號,並按檢驗要求,立即將樣品放在冰箱或冰盒中,積極准備條件進行檢驗。
各食品微生物檢驗室必須備有專用冰箱存放樣品。一般陽性樣品,發出報告後3d(特殊情況
適當延長),方能處理樣品。進口食品的陽性樣品,需保存6個月,方能處理。陰性樣品可及時處理。
檢驗完後,檢驗人員應及時填寫原始記錄,簽名後,送質控辦出具檢驗報告。