微生物鑒定
分離菌株
擴增培養
製片觀察形態
必要時進行染色
之後是生化試驗
根據不同菌株會有不同實驗
比如說
Vit實驗
等
⑵ biolog微生物鑒定系統
Biolog微生物鑒定步驟
一 檢測原理
Biolog微生物鑒定系統測試的是微生物在鑒定板中利用或氧化化和物的能力。測試會產生特徵性的紫色孔模式，組成代謝指紋。所有必需的營養物質和生化試劑都預先加進96孔板中，四唑紫是一種氧化還原染料，指示碳源的利用情況。.鑒定步驟非常簡單，純化分離到的菌株經擴大培養，再製成接種液加到鑒定板中。在培養過程中，一些孔中的化學物質能被氧化並將顯色物質成紫色，對照孔（A-1）和陰性孔仍然為無色。鑒定板在相應的培養條件下培養4-6小時或16-24小時即可形成代謝模式。系統軟體自動和資料庫對比，如果能找到合適的匹配，就可以得出一個鑒定結果。
二 所需器材和消耗品：
培養基、接種液、巰基乙酸鈉、長棉簽、接種棒、儲液槽、八道移液器、移液器頭、濁度儀、濁度標准品、控溫培養箱和相應的鑒定板。其中接種液自行配製，接種棒、儲液槽可選用國產品牌代替。
三 鑒定步驟：
Biolog微生物鑒定樣品處理步驟
分離純化培養基
BUG+B
通用培養基加羊血
BUA+B
厭氧培養基加羊血
BUY
酵母培養基
2%ME
2%的麥芽汁提取物
革蘭氏染色和菌落菌株形態觀察
革蘭氏染色結果
革蘭氏陰性
革蘭氏陽性
厭氧菌
酵母菌
絲狀真菌
確認實驗
氧化酶反應陽性
氧化酶反應陰性、三糖鐵實驗A/A或K/A
需在巧克力培養基上或需要6.5% CO2培養
確認實驗
氧化酶反應陰性、三糖鐵實驗K/K或K/Aw
微生物類型
GN-NENT
非腸道菌
GN-ENT
腸道菌
GN-FAS
苛生菌
GP-COCCUS-ROD桿球菌、GP-COCCUS球菌、GP-ROD桿菌
GP-ROD
（芽孢桿菌）
AN
厭氧菌
YT
酵母菌
FF
絲狀真菌
擴大培養基
BUG+B
BUG+B
巧克力培養基
BUG+B
BUG+M+T
BUA+B
BUY
2%ME
培養溫度
30℃
35-37℃
35-37℃
35-37℃
30℃
35-37℃
26℃
26℃
培養氣體
空氣
空氣
6.5% CO2
空氣或6.5% CO2
空氣
無氫氣的厭氧環境
空氣
空氣
接種液類型
GN/GP-IF
GN/GP-IF+T
GN/GP-IF+T
GN/GP-IF+T
GN/GP-IF
AN-IF
水
FF-IF
接種濁度/
濁度標准管
52%T
GN-NENT
61%T
GN-ENT
20%T
GP-COC&GP-ROD&GN-FAS
20%T
GP-COC&GP-ROD&GN-FAS
28%T
GP-ROD SB
65%T
AN
47%T
YT
75%T
FF
鑒定板類型/
每孔菌懸液的量
GN2
150μl
GN2
150μl
GN2
150μl
GP2
150μl
GP2
150μl
AN
100μl
YT
100μl
FF
100μl
培養時間（小時）
4-6,16-24
4-6,16-24
4-6,16-24
4-6,16-24
4-6,16-24
20-24
24,48,72
24,48,72,96
第一步：
在用戶自己的培養基上純化菌株，如果菌株為凍干或冷凍樣品，需要傳代培養2-3代，讓菌株恢復活力。
對純化好的菌株做革蘭氏染色，確定菌株是革蘭氏陰性還是陽性。觀察菌落外部形態或用顯微鏡觀察菌株形態，確定是酵母還是絲狀真菌，是球菌還是桿菌。
如果是革蘭氏陰性菌，還需要最終確認是腸道菌、非腸道菌或苛生菌。方法是，氧化酶陽性或氧化酶陰性但三糖鐵實驗為K/K或K/Aw，則該菌株為非腸道菌(GN-NENT)，氧化酶陰性以及三糖鐵實驗為A/A或K/A，則該菌株為腸道菌(GN-ENT)。如果菌株①需要在巧克力培養基上或需要6.5% CO2培養，②在BUG+B培養基上生長非常差，形成針尖大小的菌落，那麼可以認為這些菌是苛生菌(GN-FAS)。大多數苛生菌都是從哺乳動物的呼吸道里分離出來的，如Actinobacillus, Alysiella, Brucella, Capnocytophaga, CDC Group DF-3, CDC Group EF-4, Eikenella, Haemophilus, Kingella, Moraxella, Neisseria, Simonsiella, Suttonella,和Taylorella。
如果是革蘭氏陽性菌，用革蘭氏染色可以很容易的區分球菌和桿菌，推薦再做一個過氧化氫酶實驗，最終確定是球菌還是桿菌。通過革蘭氏染色或觀察菌落形態可以區分出芽孢桿菌。
微生物的擴大培養應該用Biolog推薦的培養基和培養條件，以便使微生物達到最佳的代謝活性，進而准確的和資料庫中的代謝模式匹配。
微生物應該是新鮮的，確保其處於指數增長期，因為一些菌株在達到穩定期時會失去生存能力或代謝活性，推薦的培養周期為4-24個小時。
如果擴大培養的量不足以配製相應的濁度，可以培養多個平板，培養時間可以延長到48個小時。
第二步：
首先確定濁度儀沒開啟電源的時候，指針應指在0%，如果沒有，用螺絲刀調整。開啟電源，取未開蓋的裝有接種液的試管，擦乾凈管壁，放入濁度儀，指針應指在100%，如果沒有，旋動右方旋鈕。然後用濁度標准管檢驗，讀數在±2%都是正常的。要使用哪管接種液，就用相應的試管做100%校正，不要在濁度儀的光路中旋轉試管。
在鑒定革蘭氏陰性腸道菌和苛生菌的時候，在接種液里應該加准確三滴巰基乙酸鈉。巰基乙酸鈉的作用是抑制芽孢形成，並且可以部分或完全的抑制A-1或其它孔由於微生物利用自身分泌的聚多糖莢膜而出現的紫色。一些非腸道菌液需要添加巰基乙酸鈉。
按照下列步驟制備均勻的菌懸液：用接種液將棉簽稍微浸濕，用棉簽在菌落上面輕輕的滾動可以將菌落取到接種液中，從而不會將培養基或其它營養物質帶入接種液。先取單菌落，不夠再取生長緊密的菌落。在試管內壁接種液液面的上方，旋轉擠壓棉簽可以將菌落團分散。然後上下移動棉簽，將分散的菌落和接種液充分混合形成均一，無菌團的菌懸液。如果菌懸液有菌團，可以讓菌團沉到管底。
調整濁度直至達到允許的范圍，增加接種液或添加菌落可以降低或升高菌懸液的密度。
將菌懸液接種到鑒定板上，不要超過20分鍾。如果長時間部接種到鑒定板上，一些菌會失去代謝活性。
第三步：
將鑒定板編上相應的號碼。把菌懸液倒入儲液槽，不要全部倒入，因為試管底部可能有未分散的菌團。按照不同的鑒定板所需的加樣量進行移液器的程序選擇，將移液器頭安放到移液器上，必要時可以用手加固，以免造成上方漏氣。吸取菌懸液，觀察每個移液器頭中的液面是否一致，如果不一致，放出菌懸液，加固移液器頭。加完菌懸液後，蓋上蓋子。
第四步：
培養環境根據所鑒定的菌株種類而定。准備一個塑料容器，在底部鋪上濕紙巾，把鑒定板放在紙巾上，可以防止鑒定板外緣孔水分的蒸發。對於革蘭氏陰性陽性菌，鑒定板培養4-6個小時可以進行一次讀數，過夜培養（16-24個小時）可再進行一次讀數。厭氧菌在培養20-24個小時後進行一次讀數即可。酵母和絲狀真菌所需培養時間稍長，一般間隔24個小時讀一次數。
第五步：
開啟讀數儀和電腦，打開Biolog軟體，並對讀數儀進行初始化，設置好各項參數（培養時間、菌株名稱、菌株編號、菌株類型），用紙巾擦乾凈培養好的鑒定板底部，放入讀數儀，A-1孔位於左上方。即可點擊「Read This」進行讀數。鑒定結果自動顯示在屏幕下方，將所得數據進行保存即可。
⑶ 現代微生物的快速鑒定的發展趨勢是什麼，舉例說明
現代微生物的快速鑒定的發展趨勢是什麼
現代微生物學，隨著分子生物學的發展，基因技術和基因工程的飛速進展，信息化時代的加速。
主要有幾種趨勢，純粹一家之言，僅來探討。
1、工業化、工程菌種的培育。通過基因技術手段，培養工業化菌種，然後通過發酵等手段進行生產，因為微生物生產的周期性和特定性，有著增加產能、節約成本等等優勢。（類似於胰島素和凝乳酶的生產現在已經在進行，但是都是運用的自然選育誘變的方法篩選的菌株，如果是定向培育，還會更好。）通過基因工程手段，培育具有特定功效的工程菌株，比如將某些特定的基因片段導入到一種菌內，達到保存該基因片段的目的等等。
2、通過微生物的繁殖特性，研究細胞微觀的趨勢，比如現在流行的通過某些標記手段來觀察酶合成、細胞吸收和排放、分子生物學的某些活動等等，通過微觀的易於操作的微生物來研究生命基礎結構細胞，來達到研究生物生長過程中的微觀現象。再通過微觀到宏觀，從單細胞到整體。的一種研究趨勢。
3、生物信息學、生物信息學衍生的學科的發展。通過生物學與計算機技術的結合，以資料庫和實驗來建立生物信息庫，通過實驗數據和實驗結論，建立模型和資料庫的分析。來探討生命的本源，甚至於說虛擬智能的研究也與生物信息學息息相關。
⑷ 如何根據生理生化反應鑒定微生物
生態學特徵以及血清學反應。如是酵母菌，常稱為該種生物的生活周期或生活史，還要注意是成醭狀。它先後對芽孢桿菌。雖然它們的蛋白質分子結構各異，但可以作為「屬」的分類特徵。 6。 （3）與溫度和氧氣的關系 測出適合某種微生物生長的溫度范圍以及它的最適生長溫度、CO2。近年來，在此基礎上。 2：在一定的固體培養基上生長的菌落特徵、顏色等，包括外形，樣品少，同時也有助於微生物間系統發育關系的探索，經過不同的發育階段；在液體培養基中生長情況，仍無法分辨它們、生活史 生物的個體在一生的生長繁殖過程中、構造、有機酸，將其分為6個細胞壁(cell wall)類型、大小、硝酸鹽和銨鹽利用情況等）、微量好氧、形狀，根據細胞壁(cell wall)的氨基酸組成，寄主范圍以及致病的情況），或對同種微生物分型、形狀，有人對18個屬的放線菌的細胞壁(cell wall)進行了分析、排列等。然而利用抗原與抗體的高度敏感特異性反應。 用已知菌種、DNA鹼基比 DNA鹼基比[（G+C）mol%]、型或菌株微生物鑒別方法——傳統方法 在傳統的分類鑒定中。利用這一特性、是否有嗜鹽性等）。若兩個樣品的吸收光譜完全相同，這種方法簡便快速，能否使牛奶凝固。 各種生物都有自己的生活史，就可用來鑒別相似的菌種、各種糖類的利用情況等）。 2、邊緣、環狀還是島狀。 根據有關學者的試驗表明。因此、黏稠度。 1，如是否產生H2S，每種物質的化學結構都有特定的紅外光譜，孢子的數目，原核生物變化范圍是20-78%、生理生化反應特徵，把它作為區分「屬」的依據之一，各種噬菌體有其嚴格的宿主范圍，培養基的顏色等。 該法常用於腸道菌，與待鑒定的對象是否發生特異性的血清學反應來鑒定未知菌種，細胞構造，能否還原硝酸鹽、形態學特徵 （1）細胞形態 在顯微鏡下觀察細胞外形大小，看它是好氧、氣味、邊緣，有無芽孢和莢膜、酵母菌進行分類，我們把這些依據作為鑒定項目、紅外光譜IR 一般認為、大腸桿菌(Escherichia coli)、型或菌株製成的抗血清，已將傷寒桿菌、乳酸菌。在自然界的分布情況（pH情況，紅外光譜技術被應用到微生物的分類中、隆起情況、隆起。 3、對噬菌體的敏感性 與血清學反應相似、滲透壓情況（是否耐高滲、水分程度等），可以初步認為它們是同一種物質，微生物分類鑒定的主要依據是形態學特徵、是否分泌水溶性色素等、生理生化反應特徵 （1）利用物質的能力 包括對各種碳源利用的能力（能否以CO2為唯一碳源、氣相色譜GC 4、高效液相色譜HPLC 5;（A+T+G+C）% 該比值的變化范圍很大，可以用某一已知的特異性噬菌體鑒定其相應的宿主、兼性好氧；在一定的斜面培養基上生長的菌苔特徵、對噬菌體的敏感性等。但是它也有不足之處。 4、凍化等。 （2）代謝產物的特殊性 這方面的鑒定項目非常多、光澤。利用此法，放線菌和真菌的繁殖器官的形狀、微生物鑒別方法——分子生物學方法 1，包括是否產生菌膜。它比單純用形態進行分類更全面，如黏細菌就是以它的生活史作為分類鑒定的依據、形狀、生態學特徵 生態學特徵主要包括它與其他生物之間的關系（是寄生還是共生，生活史有時也是一項指標、質譜分析MS 三： （G+C）mol%=（G+C）/，反之亦然，藉助於紅外線光譜區分屬內的種和菌株是困難的、細胞壁(cell wall)組分分析 細胞壁(cell wall)組分分析首先應用於放線菌分類中。 二，近年來又應用於放線菌分類中、微生物鑒別方法——新技術新方法 1，均勻渾濁還是發生沉澱。在分類鑒定中、對生長因子的要求（是否需要生長因子以及需要什麼生長因子等），不僅可以初步了解各屬菌的細胞成分的化學性質。 3、吲哚，結合形態特徵提出了相應的科屬檢索表。在鑒定時、正反面顏色、醇、質地，又根據細胞壁(cell wall)的糖的組成分成4個糖類型、大小、芽孢的大小和位置、血清學反應 很多細菌有十分相似的外表結構（如鞭毛）或有作用相同的酶（如乳酸桿菌屬內各種細菌都有乳酸脫氫酶），但在普通技術下（如電子顯微鏡或生化反應）、肺炎鏈球菌等菌分成數十種菌型，進行一系列的觀察和鑒定工作；在半固體培養基上經穿刺接種後的生長情況、對各種氮源的利用能力（能否固氮、顏色和表面特徵等。對氧氣的關系，以G+C物質的量分數（mol%）表示，革蘭氏染色反應。 （2）群體形態 群體形態通常是指以下情況的特徵，有無氣泡、鞭毛著生部位和數目。 5、噬菌體和病毒的分類鑒定，包括生長程度、耐氧還是專性厭氧，能否運動、透明度、最低生長溫度和最高生長溫度，真核生物的變化范圍為30%-60%、能源的要求（光能還是化能。這種過程對特定的生物來講是重復循環的、氧化無機物還是氧化有機物等），結果較好
⑸ 微生物檢測或鑒定技術或方法有哪些
微生物檢測或鑒定技術或方法有哪些
通過顯微鏡直接觀察。一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度以及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特徵。這些特徵包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等方面。（見高中生物選系1《生物技術實踐》圖2-8）因此可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。
使用選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件。選擇培養基，顧名思義其作用是允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長。例如，使用以尿素作為唯一氮源的培養基能夠培養出可合成脲酶的微生物；在培養基中PH調至酸性有利於黴菌的生長繁殖（抑制細菌的生命活動）等。選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特徵進行間接判斷，得到的微生物往往並不只有一種，但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。
使用鑒別培養基。即根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學葯品。例如，水質檢驗中大腸桿菌的檢驗（大腸桿菌的存在數量用以衡量水被糞便污染的程度）就用到了伊紅—美藍試劑，該試劑與水或乳製品中的大腸桿菌反應出現深紫色且帶有金屬光澤，屬於大腸桿菌的特徵反應。與選擇培養相比，鑒別培養基的鑒別所得結果的范圍比較小，一般可直接測定某微生物的種類。
⑹ 什麼是微生物鑒定
自動微生物鑒定系統是傳統的微生物鑒定主要參考《伯傑式細菌鑒定手冊》和《真菌鑒定手冊》，鑒定過程繁瑣，耗時長，容易出錯，對經驗要求非常高。
商品化的自動微生物系統有效地解決了這個問題，目前自動微生物鑒定系統從原理上包括以下幾種：
1)基於表型的鑒定方法：如美國Biolog公司的Microstation和Omnilog自動微生物鑒定系統，基於95種碳源或化學敏感物質的利用為原理，可鑒定細菌、酵母和黴菌超過2650種；另外還有基於脂肪酸鑒定的方法，採用氣相色譜分析微生物細胞壁的脂肪酸構成；在臨床領域，梅里埃、BD、熱電和西門子都有相應的自動微生物鑒定系統，其資料庫主要以鑒定致病菌為主，通常是200-600種資料庫，可做葯敏測試；
2)基於基因型的鑒定方法：如基因測序法及基因條帶圖譜法，以Life和杜邦為典型代表。
3)基於蛋白的鑒定方法：以布魯克和梅里埃為代表，基於蛋白質飛行質譜平台，分析不同高度保守的微生物核糖體蛋白電解離後的電子飛行時間進行鑒定。
三類方法各有優缺點，理論上不沖突，應該互為補充，應根據需要進行選擇。
⑺ 微生物的菌種鑒定方法與步驟（鑒定到「株」一級）
首先如果你的菌株是自然界中分離得到，就只能鑒定到種，不能鑒定到株，因為多多少少和其他株系的細菌有區別，即便你做了一些特徵的鑒定，發現和某一株細菌一模一樣，你也沒有理由說你的細菌就是那一株細菌，因為你不可能把所有的特徵都做完，株和株之間的關系就相當於不同的人之間的關系，世界上不可能有完全相同的兩個人。除非你知道你的細菌本來就是某一株細菌擴增出來的（而且要保證沒有變異，否則就是一個新株），可是這樣就沒必要鑒定了。
菌種鑒定一般就只要提取基因組DNA，然後PCR擴增16srDNA片段，上GeneBank或者Eztaxon對比即可。一般序列相似度在97%以上就可以認為是同種細菌（當然也有例外，DNA序列僅僅是一個參考指標）。
⑻ 微生物的分類鑒定技術主要有哪些
微生物的來分類鑒定技術主要源有哪些
革蘭氏陰性菌細胞壁特殊組份 細胞壁較薄,約10～15nm,有1～2層肽聚糖外,約占細胞壁乾重的5～20%.結構比較復雜.尚有特殊組份外膜層位於細胞壁肽聚糖層的外側,包括脂多糖、脂質雙層、脂蛋白三部分.
脂蛋白（Lipoprotein）一端以蛋白質部分共價鍵連接於肽聚糖的四肽側鏈上另一端以脂質部分經共價鍵連接於外膜的磷酸上.其功能是穩定外膜並將之固定於肽聚糖層.
脂質雙層 是革蘭陰性菌細胞壁的主要結構,除了轉運營養物質外,還有屏障作用,能阻止多種物質透過,抵抗許多化學葯物的作用,所以革蘭氏陰性菌對溶菌酶、青黴素等比革蘭氏陽性具有較大的抵抗力.一些化學物質如乙二胺四乙酸（EDTA）與2%十二烷基硫酸鈉（SDS）或45%酚水溶液可以將外膜除去,而留下堅韌的肽聚糖層.此外,外膜蛋白質還可作為某些噬菌體和性菌毛的受體.
⑼ 微生物群落中關鍵物種的區分和鑒定有哪些方法
微生物群落中關鍵物種的區分和鑒定有哪些方法
微生物群落的種群多樣性一直是微生物生態學和環境學科研究的重點。近幾年來，微生物群落結構成為研究的熱點。首先，群落結構決定了生態功能的特性和強弱。其次，群落結構的高穩定性是實現生態功能的重要因素。再次，群落結構變化是標記環境變化的重要方面。因此，通過對目標環境微生物群落的種群結構和多樣性進行解析並研究其動態變化，可以為優化群落結構、調節群落功能和發現新的重要微生物功能類群提供可靠的依據。
從年代上來看，微生物群落結構和多樣性解析技術的發展可以分為三個階段。20世紀70年代以前主要依賴傳統的培養分離方法，依靠形態學、培養特徵、生理生化特性的比較進行分類鑒定和計數，對環境微生物群落結構及多樣性的認識是不全面和有選擇性的，方法的分辨水平低。在70和80年代，研究人員通過對微生物化學成分的分析總結出了一些規律性的結論，從而建立了一些微生物分類和定量的方法即生物標記物方法，對環境微生物群落結構及多樣性的認識進入到較客觀的層次上。在80和90年代，現代分子生物學技術以DNA為目標物，通過rRNA基因測序技術和基因指紋圖譜等方法，比較精確地揭示了微生物種類和遺傳的多樣性，並給出了關於群落結構的直觀信息。