生物实验基础
生物的实验技术,含普通的选育,发酵及分子等
② 有哪些基本的生物实验材料
介绍几种理想的生物实验材料
选用理想的生物实验材料是保证实验效果的重要条件，本人在实践中摸索了几种实验的理想材料，现介绍如下。
1 光合作用的条件和产物
本实验用一串红（串红）的叶作材料效果好。
将盆栽一串红先饥饿一夜之后，取成对的黑片将所选的一串红叶的一部分上下相对夹住，随即对其进行光照3h左右，此叶便可摘下，撤掉黑片，将其放入隔水加热的酒精液中脱色，然后将其取出放到清水中漂洗后再用碘酒染色，此叶便可出现理想的实验结果。
本实验进行时节正值一串红（串红）生长旺盛期，它分叶多，而且叶的颜色很绿，它的老叶、成叶及新叶都可用于实验且见效，这些特点对实验极为有利。
一串红材料易得，盆栽或花市买均可。
2 红墨水在茎中的运输
选新鲜蒿子秆的茎叶一段，将其下端插入1：1的红墨水中1～2min，可见茎内有红丝柱出现，随即其叶脉变红，现象十分明显。
蒿子秆于菜市长年有售，不仅实验见效快、明显，而且很节省，1kg即可供数百组实验所用。
3 植物细胞质壁分离和复原
选落葵（木耳菜）的紫茎表皮作本实验效果很好。用镊子撕取落葵紫茎段的表皮1块制成临时装片，于低倍镜下便可观察到其充满紫色大液泡的细胞群遍布视野，在装片的一侧滴加1滴10％的蔗糖溶液，在另一侧用吸水纸吸，lmin不到就见到其细胞质壁分离现象，再改滴1～2滴清水，操作同上，经1～2min出现其质壁分离复原现象，非常清晰。
紫茎落葵菜市场有售，它的茎颜色很紫，其表皮很易撕取且含紫色细胞很多，用于实验见效快。1段茎可供多组学生撕取，很节省。常用的紫色洋葱不易选购，其紫色部分有限，表皮不好撕且易带果肉，紫色很浅，实验见效慢，可见本实验以首选紫茎落葵为宜。
③ 生物基础实验有哪些
这个是分子生物学实验基础知识，你可以看一下。http://www.bioon.com/experiment/General1/2210.shtml
④ 生物实验的基本仪器有哪些
首先要明确生物实验室有不同的侧重和分类，如微生物实验室、细胞生物学实验室、分子生物学实验室、组织培养实验室等。根据不同的生物实验室，其常用的仪器也有所不同。
一般来说，微生物实验室常用仪器有：恒温培养箱、霉菌培养箱、生化培养箱、超净工作台、高压灭菌器、烘箱、加热板、电炉、电子分析天平、磁力搅拌器、水浴锅、摇床、离心机、低温保存箱、移液器、PH计、分光光度计、光学显微镜、扫描显微镜、均质器等。
分子生物学以及细胞生物学实验室常用仪器有：二氧化碳培养箱、生物安全柜、低温保存箱、烘箱、高压灭菌器、分析天平、普通天平、移液器、离心机、倒置显微镜、PCR仪、电泳仪、脱色摇床等。
组织培养实验室常用仪器有：高压灭菌器、烘箱、摇床、光照培养箱、人工气候培养箱、分析天平、普通天平、超净工作台等。
而从实验室工作流程来看，则分为样品保存、样品前处理、培养过程、观察分析等。在不同的工作环节则需要不同的仪器。
一般来说，样品保存常用仪器有冰箱/超低温冰箱、液氮罐等。样品前处理常用仪器有移液器、天平、均质/搅拌系列、离心机、冻干机、高压灭菌器以及电泳仪等。
在培养过程常用仪器有培养箱系列、生物安全柜/超净工作台、发酵罐、摇床、水浴、转瓶机、PCR仪、酶标仪等。观察分析时常用仪器有显微镜、菌落计数仪、流式细胞仪、DNA测序仪、高效色谱系列等。在生物实验室中还可能会用到洗瓶机、超纯水系列、超声波清洗机等仪器。
⑤ 生物实验设计有哪些原则
1、对照性原则：
空白对照（即不给对照组以任何处理因素）
条件对照（给回对照组以部分实验因素，但不答是要研究的处理因素）
自身对照（实验和对照都在同一研究对象上进行，可以是不同时间或部位）
相互对照原则（不单独设对照组，而是几个实验组相互对照）
2、单因子变量原则；
3、随机性原则；
4、平行重复性原则。
(5)生物实验基础扩展阅读：
生物实验的好处：
生物实验运用一定的仪器、材料和药品，通过科学方法，有目的地观察研究一般情况下不易观察到的生物体结构和生命活动现象的过程。生物学是一门以实验为基础的自然科学。通过生物实验，不仅能帮助学生理解生物学的概念和规律，真正学好生物学基础知识，而且有利于启发学生积极思维，进行科学方法训练，培养学生的科学素质。
⑥ 高中生物重要实验归纳
我是一名生物老师，碰巧今年也高三任教，就高考实验方面，我有几点建议，都是出自自己想法，讲得不对的请谅解。
一、高考生物高中生物实验题型归纳下：一种是选择题考查课本实验基础及知识点，关键就是要求学生掌握书本每一个实验的原理、选材要求、试剂选择、步骤、注意事项等等。第二种是填空题考查，难的可能要实验设计。我重点展开第二种情况。
二、关于考查学生实验设计及实验填空和实验判断修改方面的题型，我认为最关键的就是掌握好“对照实验”的原理、步骤等。我们在专题复习实验时，重点讲解的也是对照实验的方法及基础知识。引导学生认真审题找出实验目的，根据实验目的获取两大信息，第一是实验性质，属于验证性实验还是探究性实验，这个将决定我们最后如何描述实验结果和归纳实验结论。比如：探究镍是否是小麦幼苗生长的必须矿质元素。这个实验目的表明的就是探究性实验，而我们最后回答结论时就必须分组讨论，如果实验现象是。。。，则镍不是小麦幼苗生长必须的矿质元素；如果实验现象是。。。，则镍是小麦幼苗生长所必须的矿质元素。第二，我们要从实验目的中找出实验变量，即自变量、因变量和无关变量。自变量就是题目要探究的量，镍就是这个实验的变量；因变量就是随着自变量变化而变化的量，比如小麦幼苗的生长状况；无关变量就是其他的一些可能会干扰和影响实验结果的量，比如光照、温度、水分、其他矿质元素、小麦幼苗的起始长势和每一组的数量等等。实验目的读完，就必须了解对照实验的原则——单一变量原则，即对照组和实验组只允许一个变量即实验目的中得出的自变量，而其他的无关变量必须相同且适宜，这样因变量才会是由自变量变化导致的。最后是书写实验步骤，一般我们大致分为三步;：第一步分组与编号（分对照组与实验组，对照组就是没有对自变量处理的组而且也无法得出实验结论，而实验组是对自变量进行处理的组并且可以得出实验结论），第二步变量处理（无关变量与自变量处理，无关变量要做到相同且适宜），第三步观察记录检测等。
例举一例：探究镍是否是小麦幼苗生长所必须的矿质元素
得出信息：探究性实验，结果预期描述要分情况描述，结论也要分组讨论
自变量是镍，所以对照组添加镍，而实验组缺镍
无关变量：栽培过程要有相同的光照、水分、温度、和其他矿质元素，实验组与对照组的小麦幼苗初始长势相同，数量相等，培养相同的时间等。
步骤：取两个型号相等的烧杯，编号甲、乙
往甲乙烧杯中加入等量的完全营养液和缺镍的完全营养液（甲为对照组，乙为实验组），往甲乙两烧杯中放入相同长势数量相等的小麦幼苗，并用固定泡沫固定好小麦的根让其至于液面下，讲甲乙两烧杯至于适宜的环境条件下培养相同的时间
观察并记录甲乙两烧杯中小麦幼苗的生长状况
实验预期与结论：甲乙长势相同，生长状况良好，镍不是小麦幼苗生长所必须的矿质元素
甲长势很好，而乙长势不如甲，出现了病症，镍是小麦幼苗生长所必须的矿质元素。
⑦ 高中生物实验总结
所有有色鉴别反应：
①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀.(水浴加热)
②脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒.(要显微镜观察)
③蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色反应.(要先加A液NaOH 溶液再加B液CuSO4 溶液)
④染色(质)体+ 醋酸洋红(或龙胆紫) 红色(或紫色)
⑤淀粉+碘液 蓝色
⑥DNA+二苯胺试剂 蓝色(水浴加热)
⑦大肠杆菌+伊红-美蓝 产生紫色,略带金属光泽
⑧ 生物学研究生复试实验基础操作怎么考
生物学研究生复试实验基础操作是以面试问答的形式进行考察的。
一、考生专抽题并作属答。考官会事先准备一些与实验相关的题目，让考生自己抽题并作答。回答问题的时候，最好有层次一些，条理清晰。
二、考官根据考生的回答进行深入提问。有可能是对抽题题目的延伸，也有可能是根据考生回答的漏洞进行提问，不要紧张，有问必答就可以。
⑨ 寻求微生物实验基本操作知识
这是薛泉宏微生物学课的精品课堂网站：里面有课件等资料，但没有教材，遗憾
http://netc.nwsuaf.e.cn/jingpin/2003/wsw/index.htm
《微生物学》教学大纲
第一部分、有关本科程的说明
1、本课程的性质和任务
微生物学是现代生物学科的先头学科,是科学技术现代化和农业现代化的重要学科领域之一。就其学科性质而言。它又是一门实践性学科。因此,它既是高等农业院校有关专业的专业基础课又是专业技术课。生物技术、生物工程、微生物、农、植、园等专业的学生通过此门课程的学习,不仅要获得微生物学理论知识,还要掌握基本的微生物研究操作技术和生产工程技能。本课程要求有较好的生物学及生物化学基础,故应该在二年级下学期开设。据现代微生物学学科发展速度,本课程至少要保证60学时,考核方式除微生物基础知识的考试考查外,对微生物学的基本操作技术与技能进行实际考查。
2、本大纲的使用专业和学时数
讲授内容及要求（授课学时56、各专业可适当选择，实验课学时24、总学时80）
表1 讲述内容及学时数分配表
章节 讲述内容 学时数 备注
一 绪论 2
二 微生物形态学及代表分类 16
三 微生物营养、呼吸、生长及生态系 14
四 微生物的代谢和发酵 4
五 微生物遗传与变异 6
六 微生物分类与鉴定 4
七 微生物在自然界物质转化中的作用 6
八 应用微生物 4
九 微生物实验（内容附后） 24
3、本门课程与其他课程的联系与分工
微生物学是现代生物学科的先头学科,是科学技术现代化和农业现代化的重要学科领域之一，它既是高等农业院校有关专业的专业基础课又是专业技术课。本课程要求有较好的生物学及生物化学基础,该课程是微生物专业、生物技术专业的专业课,也是该专业及其他相关专业的专业基础课，如《发酵微生物》、《微生物遗传》、《酶工程》、《发酵工程》、《病理学》、《分子生物学》等。
4、主要教学方法与媒体要求
《微生物学》课程以课堂教授为主，同时结合电化手段如多媒体显微动画演示、幻灯片、教学挂图等进行辅助教学。微生物实验是微生物教学的重要环节，它是对课堂讲授的内容的印证和微生物操作技术的培养与训练,对直观理解课堂教授内容具有重要的作用。
5、主要参考书目
薛泉宏主编的《微生物学》，西安：世界图书出版公司，2000
周德庆主编的《微生物学教程》，北京：复旦大学出版社，1987
程丽娟、薛泉宏主编的《微生物学实验指导》，西安：世界图书出版公司，2000等。
第二部分、课程内容说明（基本知识点、重点和难点）
一、绪论
1、目的 启迪学生为国争光,激发学生对微生物学的浓厚兴趣;鼓励学生勇于实践,勤于思考为科学发展做出奉献。
2、内容 微生物学研究对象;微生物学分科;本课程的任务;微生物学发展史与发展趋势。
3、方法 放录相(微生物学发展史)。重点讲授;我国祖先对微生物学的贡献和现代微生物学发展趋势。
4、学时 2学时。
二、微生物形态学及代表类群
1、目的 掌握原核、真核,与非细胞微生物的基本形态结构,繁殖方式,各类微生物主要区别，了解微生物分类原则、系统。该章为本门课程的重点。
2、内容
(1)原核微生物
a、原核微生物的主要特征；
b、细菌形态大小;细胞基本结构;特殊结构;内含物;原生质;细菌运动;繁殖;个体与群体形态等。
c、放线菌 形态特征;繁殖方式;代表属种。
d、兰细菌和其它原核微生物 立克次体,衣原体,枝原体和类菌质体（可自学）。
e、细菌分类系统（可自学）。
(2)真核微生物-真菌
a、真菌的细胞结构
b、霉菌 形态特征;菌丝变态、菌丝组织体;繁殖(无性和有性繁殖、无性与有性孢子)农业上常见霉菌。
c、酵母 形态特征;繁殖;常见酵母属种。
d、大型食用与药用真菌 形态特征与生活史;常见食用与药用真菌简介。
e、真菌分类系统（可自学）。
(3)非细胞生物-病毒
a、病毒 形态、大小与结构;类别与分类(昆虫病毒、植物病毒、分类与命名原则)
b、噬菌体 形态结构;烈性和温和噬菌体的侵染过程;溶原现象。
c、一步生长曲线。
d、类病毒（自学）。
3、方法 重点讲授,辅课堂讨论(着重各类微生物的区别)。
4、学时 16学时。
三、微生物营养、呼吸、生长和生态系
1、目的 学习微生物生理基础知识,微生物营养类型;微生物呼吸与能量代谢;微生物生长发育与环境条件;微生物培养基配制原则和方法等,从而掌握微生物工作的基本原理。该章为本门课程的重点。
2、内容
(1)微生物的营养
a、细胞的化学组成
b、营养源及其生理作用
c、营养物质的吸收
d、微生物的营养类型
e、培养基(制备原则与方法原理、类型)
(2)呼吸与生长
a、能量代谢 (ATP的光合磷酸化和氧化磷酸化、ATP的利用效率)
b、呼吸类型 (有氧呼吸、无氧呼吸与发酵)
c、微生物与氧的关系 (好气性微生物、嫌气性微生物和兼性厌气性微生物)
d、生长 (群体生长,生物量,生长曲线,世代时间和连续培养)
e、环境条件对微生物生长的影响
(3)生态系
土壤-微生物生态系;植物-微生物生态系;微生物与微生物的关系;空气和水域微生物生态系;
3、方法 重点讲授:营养类型、呼吸与能量代谢;辅以课堂讨论 (培养基制备与环境条件,灭菌与消毒方法)
4、学时 14学时。
四、微生物的代谢和发酵
1、目的 简略了解微生物分解代谢和合成代谢及相互关系；微生物独特合成代谢途径；微生物代谢调控与发酵生产。
2、内容
a、 微生物分解代谢和合成代谢及相互关系
b、微生物独特合成代谢途径
c、微生物代谢调控与发酵生产。
3、学时 4学时。
五、微生物遗传变异与育种
1、目的 简略介绍微生物遗传变异及有关遗传学概念以使学生深入学习及提高打基础。掌握基因突变现象和原因，菌种保藏的原理及常用方法。
2、内容
a、突变和诱变育种；b、基因重组和基因工程；c、菌种退化、复化和保藏
3、学时 6学时。
六、微生物分类和鉴定
1、目的 介绍微生物通用分类单元以及微生物在生物界的地位，介绍微生物的经典分类及现代分类方法，并辅助介绍血清学反应有关内容。
2、内容
a、微生物通用分类单元
b、微生物在生物界的地位
c、微生物的经典分类及现代分类方法
e、传染与免疫及血清学反应特征
3、学时 4学时。
七、微生物在自然界物质转化中的作用
1、目的 着重掌握微生物在自然界物质循环中的积极作用;植物残体的微生物转化过程,了解微生物在土壤肥力中的重要性。
2、内容
(1)植物残体的约略分析
(2)自然界碳素的生物循环
a、不含氮有机物的有氧降解
b、酒精发酵,乳酸发酵,丁酸发酵,甲烷发酵及其主要微生物
c、纤维素与果胶物质分解
(3)自然界的氮素生物循环
a、含氮有机物的氨化作用b、硝化作用c、硝酸还原与脱氮作用d、生物固氮作用
3、方法:自学为主,重点讲授:辅以答疑。
4、学时 6学时(讲授4学时,讨论与答疑2学时)。
八、应用微生物
1、目的 学习食用菌与微生物农药的生产过程,加强实践活动培养微生物工作操作技术与能力。
2、内容
(1)食用菌生产
(2)微生物农药生产使用
(3)沼气发酵
3、方法 自学为主,辅以讨论答疑,配合放录相(凤尾菇栽培等)
4、学时 4学时
九、实验安排
本课程的实验,包括对课堂讲授的内容的印证和微生物操作技术的培养与训练,后者为重点。因而在实验安排上具有较强的独立性。它要以培养微生物工作的基本修养,建立无菌观念,掌握无菌操作技术,熟悉显微镜使用原理和方法并具有初步的微生物工作和生产技能为主要目的。
实验一 3学时
1、显微镜使用 (放录相)
2、油镜的使用及细菌形态观察
3、环境中微生物检测 (由结果中分辨真,细,放,各类微生物菌落)
实验报告:要求绘出细菌形态图
实验二 3学时
1、细菌运动性观察(电视)
2、无菌操作演示(试管斜面接种)
3、细菌简单染色与革兰氏染色
实验报告;绘出细菌形态图并注明染色结果
实验三 3学时
1、荚膜与鞭毛观察(电视)
2、芽孢与伴孢晶体染色(要求无菌操作)
实验报告:绘出芽孢与伴孢晶体显微镜视野图
实验四 3学时
1、昆虫病毒多角体观察(电视)
2、放线菌形态观察(菌落与制片观察)
3、真菌形态观察(菌落与制片观察)
实验报告:绘出显微镜观察视野图
实验五 3学时
1、显微镜直接测数
2、细菌大小测定
实验报告:列出实验测定结果
实验六 3学时
1、培养基制备
2、灭菌与消毒
为分离培养准备条件
实验七 3学时
1、细菌培养技术(录相)
2、微生物的分离培养与纯化(含测数)
3、拮抗试验或抗生素抑菌测验
实验报告:写出试验结果并辨认各类微生物菌落形态
实验八 3学时
1、酒精发酵
2、乳酸发酵
实验报告:写出发酵原理并分析实验结果
注:以上实验据各专业可以调整。
⑩ 分子生物学实验基本操作规程
第3章 分子生物学实验基本操作技术
这里的实验基本操作技术是指在分子生物学实验中使用范围最广、使用频率最高、几乎所有实验都要应用的技术。器皿的清洗，试管、量筒（杯）、容量瓶、吸管及移液器、电子天平等量具的正确操作和使用、试剂配制等技术，应当都是基本操作技术，但这些内容已在分析化学、生物化学的实验课程中作了详细介绍。本章主要介绍与分子生物学实验有关的除（灭）菌技术、无菌操作技术和微量操作技术。
3.1 除(灭)菌技术
在进行分子生物学实验过程中，需要一个清洁的实验环境，所使用的器皿及溶液均需要进行除（灭）菌处理，一方面避免环境中微生物的污染，另一方面还可消除蛋白酶和核酸酶对实验的干扰和影响。在进行微生物及细胞的纯培养时要求更高，不能有任何外来杂菌。因此，对所有器材、培养基要进行严格灭菌，对工作场所进行消毒，保证工作顺利进行。
实验室常用的除灭菌方法主要有物理方法及化学方法两种。物理方法包括用湿热（高压蒸汽）、干热、紫外线、过滤、离心沉淀等方法除去微生物；化学方法是使用化学消毒剂、抗菌素等杀死或抑制微生物。根据被灭菌物品的材料性质和实验要求，可采取不同的消毒灭菌方法。
3.1.1 物理灭菌法
（1）干热灭菌：干热灭菌包括火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。
火焰灼烧适用于金属用具，如接种环、接种针和手术器械等，玻璃器皿的口颈，如试管口和瓶口，玻璃棒等的灭菌处理。这种方法灭菌迅速彻底。
热空气灭菌一般在烤箱中进行，利用高温干燥空气（160℃170℃）加热灭菌12h，适用于玻璃器皿和培养皿等。干热消毒后的器皿干燥，易于保存。缺点是干热传导慢，可能有冷空气存留于烤箱内，因此要求较高的温度和较长的时间才能达到消毒的目的。应当注意，干烤灭菌完毕后不得马上将烤箱门打开，须等温度降至70℃以下时再开箱门，以免冷空气突然进入，影响消毒效果和损坏玻璃器皿或发生意外事故。在灭菌时，物品不能放的太挤。灭菌的玻璃器皿中不可有水，有水的玻璃器皿在干热灭菌时容易炸裂。培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此方法消毒。
（2）湿热灭菌：在相同温度下，湿热的灭菌效力比干热灭菌好。原因是：（1）热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强。水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱键，更易使蛋白质变性。加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。蛋白质含水量与其凝固温度成反比；（2）热蒸汽比热空气穿透力强，能更有效地杀灭微生物；（3）蒸汽存在潜能，当气体转变成液体时可放出大量热能，故可更迅速提高灭菌物体的温度。
湿热灭菌常用的方法有高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌和煮沸灭菌。其中高压蒸汽灭菌法最为常用，效果最好。常压蒸汽灭菌法不能在短时间内杀死细菌芽孢，必须采取间歇灭菌或持续灭菌的方法，才能达到完全灭菌。而煮沸灭菌仅用于注射器及某些用具的灭菌，被灭菌物品的湿度太大。所以，这两种方法较少使用。
高压蒸气灭菌是在密闭的高压蒸汽锅中进行的。其原理是：将待灭菌的物体放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，将锅内的水加热煮沸，并把其中原有的冷空气彻底驱尽后将锅密闭，再继续加热就会使锅内的蒸汽压逐渐上升，从而使温度也随之上升到100℃以上。
灭菌时，根据不同的物品选择不同压力和时间，一般物品（如布类、金属器械、玻璃器皿等）消毒的要求是0.15MPa下15min，培养液和橡胶制品为0.1MPa下10min。灭菌前在锅内加适量的水，加水过少，易将灭菌锅烧干，引起炸裂事故。加水过多有可能引起灭菌物品浸水。物品不能装得过满，以免影响消毒器内气体流通。导气管要伸至罐底并防止堵塞。在加热升压之前，先要打开排气阀门排放消毒器内的冷空气，冷空气排出后，关闭排气阀门，同时检验安全阀活动自如，开始升压，当达到所需压力时，开始计时，并控制压力恒定。灭菌过程中，操作者不能离开工作岗位，要定时检查压力及安全，防止意外事件发生。灭菌完毕后一定要先打开阀门放气，当灭菌锅内压力下降到“0”时，再打开灭菌锅的盖。也可在灭菌完毕后，关闭电源总阀，让灭菌物品自然冷却，待灭菌锅压力表降至“0”时，再取出灭菌物品。
蒸汽压力与温度的关系
蒸汽压力（表压） 蒸汽温度
Kg/cm2 MPa ℃ ℉
0.00 0.00 100 212
0.25 0.025 107.0 224
0.50 0.050 112.0 234
0.75 0.075 115.5 240
1.00 0.100 121.0 250
1.50 0.150 128.0 262
2.00 0.200 134.5 274
（3）紫外线杀菌： 紫外线的波长范围是200300nm，杀菌范围为240280nm，其中波长在260nm左右的紫外线杀菌作用最强。紫外灯是人工制造的低压水银灯，能辐射出257.3nm的紫外线，杀菌能力强且较稳定。紫外线杀菌作用是因为它可以被蛋白质（波长为280nm）和核酸（波长为260nm）吸收，造成这些分子的变性失活。紫外线穿透能力很差，不能穿透玻璃、衣物、纸张和大多数其他物体，但能穿透空气，主要用于实验室空气、操作台表面和不能使用其它方法进行灭菌的物品。紫外线直接照射方便、效果好，经一定的时间照射后，可以消灭空气中大部分细菌。培养室紫外线灯应距地面不超过2.5米，且消毒物品不宜相互遮挡，照射不到的地方起不到消毒作用。
紫外线照射可产生臭氧，污染空气，对试剂及培养液都有不良影响，对人皮肤也有伤害。
（4）过滤除菌：很多液体不能采用高压灭菌的方法进行灭菌处理，如血清、合成培养液、酶及含有生物活性蛋白的液体等，可采用过滤的方法除去细菌等微生物。滤器有抽吸（抽滤）式及加压式两种类型；滤板（或滤膜）结构可分为石棉板、玻璃或微孔膜。常用的滤器有Zeiss滤器（蔡氏滤器）、玻璃滤器和微孔滤膜滤器，其中微孔滤膜滤器最为常用。
微孔滤膜滤器多为塑料结构，分为上下两部分，中间可放置纤维素滤膜。将待过滤液体吸入注射器内，慢慢注入滤器上部的孔中，通过中间的滤膜即可。可用于包括血清在内的各种培养液的过滤除菌，速度快，效果好。滤膜为一次性的特制混合纤维素滤膜，其孔径有0.6μm、0.45μm、0.22μm三种，用于过滤除菌时，最好选用0.22μm的滤膜（可以除去细菌和霉菌）。安装滤膜时要注意：先将滤膜在蒸馏水中浸湿再安装；滤膜薄且光滑，容易移动，千万不能装偏而使过滤失败；同时要注意滤膜的正反面，正面（光面）应朝上。由于滤膜薄，承受压力有限，压力不能过大、过猛，以免造成滤膜破裂。每次过滤后应打开滤器，核实滤膜是否移动和破裂，以保证有效过滤除菌。微孔滤膜滤器的清洗、消毒方法很简单，用完后去掉滤膜，用去离子水冲洗干净，再将新的滤膜正确放入其中，包裹后可高压灭菌处理，也可直接煮沸灭菌处理。现在也有一次性小滤器。
3.1.2 化学灭菌法
应用化学制剂破坏细菌代谢机能。常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、福尔马林、高锰酸钾、新洁尔灭等。最常见的是75%酒精及1‰的新洁尔灭，前者主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理。后者则主要用于器械的浸泡及皮肤和操作室壁面的擦试消毒。化学灭菌法操作简单、方便有效。
将高锰酸钾粉末与适量体积的福尔马林混合，会产生大量的甲醛气体，常用于无菌室的熏蒸消毒。
3.1.3抗生素灭菌法
主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。要注意不能完全依赖抗生素来达到消毒灭菌的目的，还应严格无菌操作。常用的抗生素是青霉素和链霉素。
3.2无菌操作技术
无菌技术是指实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法，是实验过程中预防和控制交叉污染的一项重要基本操作。在生化实验中经常涉及到无菌操作技术，尤其是微生物的纯培养、细胞及胚胎的培养，更需要严格的无菌操作技术。在无菌操作过程中，任何一个环节都不得违反操作原则，否则就可能造成实验失败。因此，必须加强无菌观念，准确熟练地掌握无菌技术，严格遵守无菌操作规程。
无菌技术包括四部分内容：实验所用的玻璃、塑料制品及金属器械的处理；实验操作对象及试剂的无菌处理；工作环境及表面的处理；实验者的操作技术。前两部分已在前面介绍过，这里主要介绍后两部分内容。
1. 周密计划 在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。
2．仔细准备 根据实验要求，准备各种所需的器材和物品，并选择适宜的方法进行包装和除（灭）菌处理，清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净工作台)内。这样可以避免开始实验后因物品不全往返拿取而增加污染机会。
3．严格操作
实验进行前，无菌室及超净工作台以紫外灯照射3060min灭菌，以70%酒精擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风机运转10min后，再开始实验操作。实验操作应在超净工作台的中央无菌区域，不要在边缘的非无菌区域操作。
为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。
在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着长袖的清洁工作服，并于开始操作前要用75％酒精擦手或用消毒液洗手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入细胞培养室需彻底洗手，戴口罩、着消毒衣帽及鞋等。
在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先要点燃酒精灯或煤气灯。以后一切操作，如安装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意：金属器械不能在火焰中烧的时间过长，以防退火，烧过的金属镊要待冷却后才能夹取组织，以免造成组织损伤。吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有害物带入营养液中。开启、关闭长有细胞或微生物的培养瓶时，火焰灭菌时间要短，防止因温度过高烧死细胞或微生物。另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞。进行无菌操作时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备用品更换。
工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养用液及其他溶液在未用前，不要过早开瓶；打开瓶盖进行操作时，瓶口朝上与台面呈45度角，减少落菌机会；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口。吸取营养液、PBS缓冲液、细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防影响试剂的效果、扩大污染或导致细胞交叉污染。工作中不能面向操作台讲话或咳嗽，以免唾沫把细菌或支原体带入工作台面发生污染。手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液时如吸管尖部碰到瓶口，则应更换干净吸管。
对于微生物或细胞而言，每次操作只处理一种微生物或一个细胞株，即使培养基相同也不要共享培养基，以免微生物或细胞间污染。
4．善始善终 实验完毕后，应及时将实验物品及废液带出工作台，关闭风机，以70%酒精擦拭无菌操作台面，关闭超净工作台的风机和照明灯，实验结束。尽管每次实验前都会进行工作台面的消毒处理，但建议实验结束后立即打开紫外灯进行消毒，特别是在夏季，以防细菌或霉菌孳生。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其他实验用品用完即取出，以利于空气流通。
3.3微量操作技术
在过去的实验中，大家使用的重量和体积计量单位主要是克（g）和毫升（ml）及其以上者，而小于g和ml的单位如毫克（mg）、微克（g）及微升（l）等极少用到。从进入分子生物学实验开始，这些很小的计量单位都将经常使用，甚至更小者如纳克（ng）、皮克（pg）及纳升（nl）等也将用到。由相对宏观的操作突然转为微量操作，对初学者来讲需要有一个熟悉并熟练的过程，关键应当注意以下几个方面的问题。
1. 熟悉并掌握微量称量器具的正确使用方法。微量电子天平（最小感量10-4g）和微量移液器（最大2l）是两种最常使用的器具，它们的使用方法请参考第2章有关内容。准确量取是微量操作的第一步，也是最重要的一步。
2. 添加。将一种或几种液体物质分别准确量取后添加到同一个Eppendorf管中，必须保证看到每一种液体都加入其中，而且在取出移液器时，Tip头的尖部不得带出任何可见的液珠。
3. 混匀并集中。全部液体加完后，总体积只有10到几十微升，难以用常规混匀的方法将各种成分彻底混匀。微量混匀的方法有：旋涡震荡混匀和弹匀。将盛有液体的Eppendorf管盖紧，握紧并将其底部与旋涡震荡器接触，液体会在管内高速旋转而混匀；也可手持盖好的Eppendorf管上端（口部），另一只手反复弹动其底部，将其中的液体混匀。最后，用高速台式离心机将全部液体甩到Eppendorf管的底部。
4. 有时将极微量的物质如DNA片段或质粒DNA溶解在几微升液体中，尽管看不见待溶解物质，但将液体加入后，用上述同样的方法进行操作，也可很好将其溶解并混匀。
5. 由于微量操作，实验结果很难用肉眼直接观察到。为了保证实验的顺利进行，在分子生物学实验过程中，每一步实验的结果都必须利用相关的检测、鉴定方法显示出来，判定正确后再进行下一步反应。这是所有科学实验的共同要求，但在分子生物学实验中更应当强调和加以注意。
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