生物素磁珠

1. DNA pull down 实验

原理：

DNA pull down 是一种研究DNA与蛋白互作的方法。其原理是：生物素标记的DNA 片段结合在链霉亲和素磁珠上，再与核蛋白孵育，从而捕获并纯化出与DNA 片段互作的蛋白。捕获的蛋白一方面可以通过Western blot验证某一特定蛋白是否与靶DNA 片段结合；另一方面也可以进行质谱鉴定，筛选出与DNA片段可能互作的蛋白质。

操作步骤：

1.探针制备：

a.对于研究的启动子靶标区域比较明确，且长度较短的DNA片段，可以直接合成并标记上生物素作为pull down探针。

b.对于研究的启动子靶标区域没具体预测区域，一般针对基因上游2000bp序列设计引物，并标记上生物素；然后通过判敏 PCR 扩增的方式钓取基因上游2000bp序列，回收纯化后作为DNA pull down的探针。

2.样本前处理

a. 用 1ml Cell lysis buffer重悬（10^7细胞）;冰上孵育10min，（5000g，4°，5min）离心，弃上清。

b. 加入2/3细胞体积的 Buffer B 悬浮细胞，超声5s裂解细胞。4℃，10,400× g for 5 min离心5min；取上清。

c. 用Buffer D稀释步骤b的上清液，-80℃冻存备用

3.Dynabead™ MyOne™ 链霉源冲运素亲和素 C1预处理：

a. 涡旋震荡磁珠40s，混匀磁珠

b. 分装60ul磁珠的1.5mL离心管中；

c. 磁力架上放置1min，弃上清；

d. 用1mL1X B&W Buffer洗涤磁珠3遍;

e. 用60ul 2X  B&W Buffer悬浮磁珠；

f. 加入60 pmol生物素标记DNA（1ug）;室温颠倒孵育 15  min;

g. 磁力架雹梁上放置3min,去上清

h. 用60 μL 1X B&W Buffer洗涤3遍；

i. 用60ul 1× B/W buffer（ without NaCl）洗涤一遍

 4.DNA pull down

 a.制备binding reaction：加入100 µL 5× EMSA buffer 及包含100 µg 核蛋白   的上清液 ；补水至 500 µL.

 b. 加500ul binding reaction到磁珠中；常温翻转20min

 c.磁力架上放置1min，弃上清；

 d.用wash buffer 洗涤3遍。

e.回收产物，进行后续WB验证或质谱鉴定。

PS:下边是如期生物DNA pull 项目手册，欢迎各位老师合作交流哈

2. 链霉亲和素磁珠饱和生物素浓度是多少

链霉亲和素磁复珠饱和生物制素浓度是多少
链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种稍偏酸性（pH6.0）的蛋白质，并且不带任何糖基。在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在N端10～12和C端19-21间断裂，形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示，1mg链霉亲和素的最高活性可达18U。

3. 国内做链霉亲和素磁珠的哪个厂家的用起来效果好啊求推荐~~~~

链霉亲和素磁珠，主要用于IVD工业磁分离全自动化学发光免疫分析及生物医药基础研究中分离生物素修饰成分的复合物。链霉亲和素磁珠用于IVD的磁分离全自动化学发光免疫分析，其悬浮稳定性、磁响应速度、非特异吸附及信噪比、结构/性能的储存稳定性是定性指标，只有这些定性指标同时都满足要求才能适用，才值得考虑其分离效价和其用于单次测试的成本。用于磁分离全自动化学发光免疫分析的链霉亲和素磁珠：进口Dynal、JSR产品应用较多，Dynal分离效价接近JSR产品的两倍，Bangs的产品磁响应速度较慢且非特异性吸附较高；截止2018年8月的国产链霉亲和素磁珠中，仅重庆博蓝鹰生物技术有限公司产品亚型MSP-SAV-Z1测试满足碱性磷酸酶和吖啶酯标记系统要求，且该亚型分离效价与Dynalbeads Myone Streptabvidin T1相当，但该公司另一亚型MSP-SAV-F1仍不能满足化学发光免疫分析要求。用于基础研究分离生物素修饰成分复合物时，进口和国产链霉亲和素磁珠产品通常都能用。链霉亲和素磁珠目前都以质量（mg或g）计量，但不同厂家产品单位质量对应分离效价差异大；针对相同测试/分离对象，以单次测试/分离的成本进行比较更合理，这也是多数厂家的报价依据。但考虑用于化学发光免疫分析的定性指标是否满足要求，很多国产链霉亲和素磁珠的报价就太高了。