生物采样箱
供化验用的水样必须有足够的代表性。从水样取出后,到分析结束之前,应尽量避免水中原有成分发生明显变化。避免外来污染,这是水质调查工作中十分重要的一环。如果所取水样没有代表性,或者成分已经发生了变化,后面的工作做得再好,也得不到正确的结果,有问题也不易查出来,因此必须注意水样的采集与保存。
一、采样计划
采样前应根据水质检验目的和任务制定采样计划,内容包括:采样目的、检验指标、采样时间、采样地点、采样方法、采样频率、采样数量、采样容器与清洗、采样体积、样品保存方法、样品标签、现场测定项目、采样质量控制、运输工具和条件等。
二、采样容器
1、应根据待测组分的特性选择合适的采样容器。
2、容器的材质应化学稳定性强,且不应与水样中组分发生反应,容器壁不应吸收或吸附待测组分。
3、采样容器应可适应环境温度的变化,抗震性能强。
4、采样容器的大小、形状和重量应适宜,能严密封口,并容易打开,且易清洗。
5、应尽量选用细口容器,容器的盖和塞的材料应与容器材料统一。在特殊情况下需用软木塞或橡胶塞时应用稳定的金属箔或聚乙烯薄膜包裹,最好有蜡封。有机物和某些微生物检测用的样品容器不能用橡胶塞,碱性的液体样品不能用玻璃塞。
6、对无机物、金属和放射性元素测定水样应使用有机材质的采样容器,如聚乙烯塑料容器等。
7、对有机物和微生物学指标测定水样应使用玻璃材质的采样容器。
8、特殊项目测定的水样可选用其他化学惰性材料材质的容器。如热敏物质应选用热吸收玻璃容器;温度高、压力大的样品或含痕量有机物的样品应选用不锈钢容器;生物(含藻类)样品应选用不透明的非活性玻璃容器,并存放阴暗处;光敏性物质应选用棕色或深色的容器。
三、采样容器的洗涤
1、测定一般理化指标采样容器的洗涤
将容器用水和洗涤剂清洗,除去灰尘、油垢后用自来水冲洗干净,然后用质量分数10%的硝酸(或盐酸)浸泡8h,取出沥干后用自来水冲洗3次,并用蒸馏水充分淋洗干净。
2、测定有机物指标采样容器的洗涤
用重铬酸钾洗液浸泡24 h,然后用自来水冲洗干净,用蒸馏水淋洗后置烘箱内180℃烘4h,冷却后再用纯化过的己烷、石油醚冲洗数次。
3、测定微生物学指标采样容器的洗涤和灭菌
(1)容器洗涤:将容器用自来水和洗涤剂洗涤,并用自来水彻底冲洗后用质量分数为10%的盐酸溶液浸泡过夜,然后依次用自来水,蒸馏水洗净。
(2)容器灭菌:热力灭菌是最可靠且普遍应用的方法。热力灭菌分干热和高压蒸气灭菌两种。干热灭菌要求160℃下维持2h;高压蒸气灭菌要求121℃下维持15 min,高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使用,应于60℃将瓶内冷凝水烘干。灭菌后的容器应在2周内使用。
四、采样器
1、采样前应选择适宜的采样器。
2、塑料或玻璃材质的采样器及用于采样的橡胶管和乳胶管要洗净备用。
3、金属材质的采样器,应先用洗涤剂清除油垢,再用自来水冲洗干净后晾干备用。
4、特殊来样器的清洗方法可参照仪器说明书。
五、水样采集
1、一般要求
(1)理化指标
采样前应先用水样荡洗采样器、容器和塞子2~3次(油类除外)。
(2)微生物学指标
同一水源、同一时间采集几类检测指标的水样时,应先采集供微生物学指标检测的水样。采样时应直接采集,不得用水样测洗已灭菌的采样瓶,并避免手指和其他物品对瓶口的沾污。
(3)注意事项
a 采样时不可搅动水底的沉积物。
b 采集测定油类的水样时,应在水面至水面下300 mm采集柱状水样,全部用于测定。不能用采集的水样冲洗采样器(瓶)。
c 采集测定溶解氧、生化需氧量和有机污染物的水样时应注满容器,上部不留空间,并采用水封。
d 含有可沉降性固体(如泥沙等)的水样,应分离除去沉积物。分离方法为:将所采水样摇匀后倒人筒形玻璃容器(如量筒),静置30 min,将已不含沉降性固体但含有悬浮性固体的水样移人采样容器并加人保存剂。测定总悬浮物和油类的水样除外。需要分别测定悬浮物和水中所含组分时,应在现场将水样经0. 45µm膜过滤后,分别加人固定剂保存。
e 测定油类、BOD5、硫化物、微生物学、放射性等项目要单独采样。
f 完成现场测定的水样,不能带回实验室供其他指标测定使用。
❷ 浮游生物采样器有哪些类型
浮游生物采样源器主要包括浮游生物网、浮游生物连续记录器和浮游生物泵等。浮游生物网可分为简单式浮游生物网和复合式浮游生物网两类。世界上第一个简单式浮游生物网是1828年研制出来的,用来捕捉小蟹和藤壶幼虫。
简单式浮游生物网由网口、网衣、网底取样瓶、桶和囊袋构成。网口由边框支撑,呈圆形、三角形或长方形等形状;网衣与网口连接,网眼大小规格很多,可根据采集对象的大小加以选用。网底取样瓶附在网衣末端,用以收集网中的浮游生物样品。
复合式浮游生物网是在网架上装配若干个网,可同时采集不同水层中的浮游生物样品。先进的复合式网配备有环境监测仪器,用电子计算机处理资料,显示环境参数和网位深度、网滤水量等数据。采集器主要由水雷形管子、筛绢、卷轴、潜水板、齿轮箱、福尔马林池等部分组成,通过管内缓缓卷动的筛绢不断过滤进入仪器中的海水,得到浮游生物样品。浮游生物泵是抽取海水的离心泵,抽取的海水经筛选过滤便可得到浮游生物样品。
❸ 环境微生物测序采样指南
随着高通量测序技术飞速发展,人们对微生物的认知也在逐渐深入。凌恩生物每天都会接到全国各类型微生物测序样本,上到山巅土壤,下至深海底泥;有老师研究植物根际和叶内微生物,也有老师关注动物昆虫肠道生理代谢的奥秘。为了得到能够研究的测序结果,规范标准的取样及送样是成功的前提。
在样本送测前,我们要注意以下几点:
1、取样使用的工具及容器必须经过灭菌处理;
2、取样后及时做好标记,记录取样相关信息;
3、样本送测前做好备份,防止意外发生丢失珍贵样本;
4、送测样本使用标准容器承装,在容器上标记清晰,送样不宜过多;
5、寄送时保持低温环境,建议使用干冰配送;
6、可使用凌恩微生态样本保真液,高品质样本是决定高品质研究成果的第一步。
常规土壤类样本取样方法-农田/森林/草原土壤等
(1) 取样方法
按实验设计确定采样范围,取样器具需事先消毒灭菌处理。采样时应去除地表杂质,根据需要挖取相应深度(如5~20 cm)的土壤,置于冰磨拍掘上运至实验室。去除可见杂质,建议过2 mm无菌筛网。同一样方多点样本等量混合均匀后取5~10 g,保存无菌EP管中,进行核酸提取,或-80℃保存备用。若不能自行提取,可置于干冰寄送至公司。
注:建议戴一次瞎核性手套、口罩,进行严格贺敬取样和操作,尽可能减少人为的污染。
根际土壤样本取样方法-作物/蔬菜/草木根系等
(1)作物类(含草地等矮小植物)根际土壤取样方法
a. 采集植物植株,去除根部大块土壤,置于冰上运输至实验室;
b. 晃动根部,去除根部松散的土壤后,使用无菌刷子从根部收集残留土壤;
c. 同一样方多点取样土壤样本等量混合均匀后,液氮速冻,置于-80℃冰箱保存。
(2)林木类根际土壤取样方法
a. 采集地面下 10-20 cm 根际土壤,置于冰上运输至实验室;
b. 过 2-5 mm 孔径无菌筛网;
c. 同一样方多点取样土壤样本等量混合均匀后,液氮速冻,置于-80℃冰箱保存。
若不能自行提取,可置于干冰寄送至公司提取。
注:取样器具请事先消毒灭菌处理。若为真菌根际土壤,请务必尽可能去除菌丝体残留,减少对 DNA/RNA 提取的干扰。
植物表面微生物取样方法
(1)取样方法
依据实验设计,进行样方设置,每一样方进行多点取样,同一样方点等量混匀成一个样本。植物根部组织可以通过摇晃振荡或无菌刷子去除根表粘附土壤。
(2)样本前处理
将植物组织浸没于无菌PBS溶液,180rpm孵育20min;取出植物组织,再次加入无菌PBS溶液,180rpm孵育20min,取出植物组织,再次加入无菌PBS溶液,超声波洗涤10min(参数:160 W,30s/30s),最后取出植物组织至于-80度冰箱保存备用。
将三次洗涤液汇总,过0.2um滤膜(或12000g离心10min,收集沉淀),收集滤膜至于-80度冰箱保存。
植物内部微生物取样方法
(1)依据实验设计,进行样方设置,每一样方进行多点取样,同一样方点等量混匀成一个样本。
(2)对植物组织进行表面消毒操作或者使用上一步“ 植物表面微生物取样”中处理过的植物组织,液氮速冻后,研磨成粉,即可用来进行核酸的提取。
植物组织表面消毒具体操作如下:
无菌水洗涤30s,70%无菌乙醇洗涤2min,2,5% NaClO(含0.1% Tween 80)浸泡5min后转移至70%无菌乙醇浸泡30s,最后使用无菌水洗涤植物组织3次,即视为对植物组织表面进行无菌化。
表面无菌化的植物组织至于-80度冰箱保存备用或进行核酸提取。
植物根表面微生物取样方法
(1)将所研究的物体放在事先灭好的无菌容器当中;
(2)加入PBS缓冲液后进行振荡,使得微生物从物体表面充分的脱落并聚集在PBS缓冲液当中,震荡至少2h以上;
(3)直接提取PBS缓冲液中的微生物或者将缓冲液用滤膜过滤之后再进行DNA的提取。
PBS浓度和PH有要求:浓度是用1x的,PH值是7.4,一般买回来的PBS是10x的,建议稀释到1x。
注意: 建议优先使用超声波洗涤 。
空气样本微生物取样方法
使用空气抽滤机,使空气通过 0.22 μm 滤膜,滤膜上有可见覆盖物(过滤时间越长,收集的空气中的灰尘越多,菌数量越多),收集完成后取下滤膜。滤膜置于冻存管中,液氮速冻,干冰寄送到实验室。
注意:由于样本特殊,微生物含量较少,建议多保管备份保存。
水体样本微生物取样方法
送样量:扩增子直径3-4cm滤膜1-2张;宏基因组直径3-4cm滤膜>=2张;
(1)研究目的进行确定水体的取样深度和范围;
(2)采样后进行滤膜过滤,选择合适孔径的滤膜,对于澄清水体或者略浑浊水体,选用0.22μm或者0.45μm的滤膜,取样体积大于5L;对于浑浊水体,建议先用大孔径的滤膜过滤一遍,再用小孔径的滤膜过滤;
(3)水体泥样的采集提供大于5g样本;
(4)用大体积干冰运输,且要保证我方在收到样品开箱检验时有足够的干冰剩余。
注意:扩增子项目将2-3L水体过滤到1-2张滤膜(0.22或0.45um)后装入到离心管中;宏基因组项目将10L水体过滤到>=2张滤膜(0.22或0.45um)后装入到离心管中。
活性污泥与水体/地表沉积物类样本取样方法
(1)活性污泥
从活性污泥装置中取大于10 ml的悬浮污泥样本(约5-10 g沉降物),保存无菌EP管中,放入液氮或置于冰上,立即运至实验室进行核酸提取,或-80℃保存备用。
注:若液态污泥样本沉降物较少,可适当增加取样量。
(2)水体/地表沉积物
取距离水底/地表0-10 cm(具体按实验需要而定)的沉积物5~10 g,保存无菌取样袋或EP管中,置于冰上运送至实验室进行核酸提取,或-80℃保存备用。若不能自行提取,可置于干冰寄送至公司提取。
❹ gmp认证微生物擦拭取样为什么用灭菌生理盐水
微生物快速检测采样箱使用说明(采样,样本,容器,灭菌,微生物,无菌,生理盐水,使用说明)
一、实验前的准备工作以及操作中的注意事项
1.样品稀释均质罐(225ml聚四氟乙烯塑料罐)、玻璃器皿等的消毒:清洗洁净后,加入经过煮沸的生理盐水225 ml(至有刻度处),盖上盖子后放入高压锅或红外线消毒柜(在特殊情况下,可以使用民用红外线消毒柜)中消毒。
2.生理盐水的配置与灭菌:取9g分析纯NaCl溶解到1000mL蒸馏水或纯净水中,取9ml加入到10mL洁净试管中,盖上硅橡胶塞或棉纱塞,放入红外线消毒柜中消毒。
3.移液器管头的消毒:将管头放入锡箔袋或用锡箔纸包好,放入民用红外线消毒柜中消毒。
4.消毒效果观察:按照菌落总数的快速测定方法做空白样品实验,观察器皿消毒效果是否良好。
5.操作前的消毒与操作中的无菌概念:
5.1在适宜的环境中,点燃酒精灯,营造局部无菌环境的。
5.2用75%酒精棉球将手和样品开口处周围抹擦消毒。
5.3操作工具如镊子、剪子、长柄勺、小刀等,在酒精灯上用火焰消毒后使用。
5.4取样和加样时尽量靠近酒精灯操作。
5.5根据不同的检测项目,采用消毒过的器皿,按检测方法说明要求进行取样、稀释、纸片加样和培养,并定时观察结果。
6.对于超标或阳性结果的样品,有条件时,应采用国家标准检验方法进行确认。
BX-2型 便携式培养箱
二、采样
(一)采样原则
1.代表性原则:采集的样品能真正反映被采样本的总体水平,也就是通过对具体代表性样本的监测能客观推测食品的质量。
2. 典型性原则:采集能充分说明达到监测目的典型样本,包括污染或怀疑污染的食品、掺假或怀疑掺假的食品、中毒或怀疑中毒的食品等。
3. 适时性原则:因为不少被检物质总是随时间发生变化的,为了保证得到正确结论应尽快检测。
4 .适量性原则:样品采集数量应满足检验要求,同时不应造成浪费。
5.不污染原则:所采集样品应尽可能保持食品原有的品质及包装型态。所采集的样品不得掺入防腐剂、不得被其他物质或致病因素所污染。
6. 无菌原则:对于需要进行微生物项目检测的样品,采样必须符合无菌操作的要求,一件采样器具只能盛装一个样品,防止交叉污染。并注意样品的冷藏运输与保存。
7. 程序原则:采样、送检、留样和出具报告均按规定的程序进行,各阶段均应有完整的手续,交接清楚。
8.同一原则:采集样品时,检测及留样、复检应为同一份样品,即同一单位、同一品牌、同一规格、同一生产日期、同一批号。
(二)采样数量
1.根据检测项目来确定采样量,既要满足检测项目要求,又要满足产品确认及复检的需要量。
2. 微生物检测用样品采样数量:
❺ 厌氧微生物采样的时候应注意什么
厌氧菌的培养方法
厌氧菌在有氧的情况下不能生长.要培养厌氧菌,必须创造一个无氧的环境.通常用培养基中加入还原剂,或用物理、化学方法去除环境中的游离氧,以降低氧化还原电势.如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基,牛心脑浸液培养基等.常用的厌氧培养方法有许多,可根据实际情况选用.
1.厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管,可放入厌氧缸内培养,厌氧缸是普通的干燥缸,用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境,从而将厌氧菌培养出来.
2.厌氧袋(Bio-bag)即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌.塑料袋透明而不透气,内装气体发生管(有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂.放入已接种好的平板后,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口.先折断气体发生管,后折断美兰指示剂管,命名袋内在半小时内造成无气环境.如不突变表示袋内已达厌氧状态,可以孵育.
3.厌氧手套箱(Anaerobie glove box)是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一.它是一个密闭的大型金属箱,箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板,板上装有两个手套,可通过手套在箱内进行操作,故名.箱侧有一交换室,具有内外二门,内门通箱内先关着.欲放物入箱,先打开外门,放入交换室,关上外门进行抽气和换气(H2,CO2,N2)达到厌氧状态,然后手伸入手套把交换室内门打开,将物品移入箱内,关上内门.箱内保持厌氧状态,也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理.该箱可调节温度,本身是孵箱或孵箱即附在其内,还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落,这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究,大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验.金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节.
4.厌氧盒:原理同厌氧袋,有成品销售.
5.生物耗氧法:在一密闭的容器内放以生物(多是植物),消耗氧气,同时产生二氧化碳,供细菌生长用.我没见过.
6.焦性末食子酸法:在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸,均匀撒上焦性末食子酸,然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面,用融化的白蜡封边,造成一个封闭空间.焦性末食子酸与碱反应后耗氧.该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养,简单.如有梭状芽孢杆菌.
7.疱肉培养基:本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法.疱肉和肉汤装入大试管,液面封凡士林,造成无氧环境.
❻ 在食品微生物检验中,对样品的采集方案有哪些要求
食品卫生微生物检验样品的采集和处理
一、范围
适用于各类食品样品的采样。
二、采样用品
灭菌探子、铲子、匙、采样器、试管、吸管、广口瓶、剪子、开罐器等。
三、样品的采集
在食品检验中,所采集的样品必须有代表性。食品中因其加工批号、原料情况(来源、种类、地区、季节等)、加工方法、运输、保藏条件、销售中的各个环节(例如有无防蝇、防污染、防蟑螂及防鼠等设备)及销售人员的责任心和卫生认识水平等均可影响食品卫生质量,因此必须考虑周密。
1、采样数量
每批样品要在容器的不同部位采取,一般定型包装食品采取一袋/瓶(不少于250g)及散装食品采取250g.
2、采样方法
(1)
采样必须在无菌操作下进行。
(2)
根据样品种类,袋装、瓶装和罐装食品,应采完整的未开封的样品。如果样品很大,则需要无菌采样器
取样;固体粉末样品,应边取边混合;液体样品通过振摇混匀;冷冻食品应保持冷冻状态(可放在冰内、冰箱的冷盒内或低温冰箱内保存),非冷冻食品需在1℃~5℃中保存。
3、
采样标签
采样前或后应贴上标签,每件样品必须标记清楚(如品名、来源、数量、采样地点、采样人及采样时间等)。
四、送检
样品送到微生物检验室应越快越好。如果路途遥远,可将不需冷冻样品保持在1℃~5℃环境中(如冰壶)。如需保持冷冻状态,则需保存在泡沫塑料隔热箱内(箱内有干冰可维持在0℃以下)。送检时,必须认真填写申请单,以供检验人员参考。
五、检验
微生物检验室接到送检申请单,应立即登记,填写实验序号,并按检验要求,立即将样品放在冰箱或冰盒中,积极准备条件进行检验。
各食品微生物检验室必须备有专用冰箱存放样品。一般阳性样品,发出报告后3d(特殊情况
适当延长),方能处理样品。进口食品的阳性样品,需保存6个月,方能处理。阴性样品可及时处理。
检验完后,检验人员应及时填写原始记录,签名后,送质控办出具检验报告。