土壤微生物测定
,加入蒸馏水,小心震荡。
2作为土壤微生物,应为它们种类繁多,如果真菌的颜色不明,要有一个提取的过程。
1,可以用高倍的光学显微镜.制作土壤浸出液。
4:取干净土壤.培养:使用完全培养皿,滴入浸出液,培养
3.长出菌落后,根据菌落的形状大小,有些是真菌菌落,有些是细菌菌落,真菌菌落可先用肉眼观察,再都制成生物涂片,分层后取出上层清液。观察真菌可以用较低倍数的光学显微镜,可染色处理,对于细菌的观查,共生在一起,要想观察好
Ⅱ 土壤微生物的检测怎么做,哪里可以做
土壤微生物是土壤中一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称,严格意义上应包括细菌、古菌、真菌、病毒、原生动物和显微藻类。其个体微小,一般以微米或毫微米来计算,通常1克土壤中有几亿到几百亿个,其种类和数量随成土环境及其土层深度的不同而变化。它们在土壤中进行氧化、硝化、氨化、固氮、硫化等过程,促进土壤有机物的分解和养分的转化;那土壤内的微生物如何测定呢,下面喆图小编带大家来了解一下。
一、培养方法
(1)稀释平板涂抹法
具体操作如下:
①准确称取 10g(精确到 0.001)采集的鲜土,倒入装有 90 ml 无菌水的 500 ml 的三角瓶中,置于往返震荡机上(120r/min,常温),震荡 20 min,使土壤充分分散成为土壤悬液。
②将上面的土壤悬液用无菌移液管吸取 5 ml 到 45 ml 稀释液中,即为 10-2稀释度,依次按 10倍法稀释,制成 10-1~-~10-6稀释度。注意:每次吸取悬液时,在稀释液中反复吸入和吹出 3-~5 次,减少因管壁吸附而造成的误差,并使悬液进一步分散,每个稀释度需要更换无菌吸管吸取悬液。)
③根据各类微生物在土壤中的数量多少选择适当稀释度的悬液接种。本实验选择细菌的稀释度为 10-~10-5,放线菌为 10~-10-4,真菌为 10-1~-10-3。 -3-2
④土壤悬液的接种方法:在无菌培养皿中倒入 15~20 ml 选择性培养基,待凝固后,用 0.2 ml无菌移液枪吸取0.2 ml各稀释度的土壤悬液,然后立即用涂抹棒将悬液均匀的涂抹于培养基表面。用同一支吸管接种时,从高稀释度开始,依次接种到低稀释度。
⑤接种了土壤悬液的培养皿,平放在超净工作台 20~30 min,使得菌液渗透入培养基内,然后倒置于 28~-30°C 生化培养箱中培养一定时间:细菌 1~-3 天,放线菌 10-~14 天,真菌 3~-7 天。
⑥培养结束后,取出培养皿计数。
(2)稀释培养法
一系列稀释度的制作与稀释平板法相同。根据各类微生物在土壤中数量的多少选择适当的稀释度,分别接种 1 ml 稀释液与制作好的液体培养基中,根据需要做 3~4 次重复,适温培养。2 三大类土壤微生物培养基的分离三大类土壤微生物的分离采用稀释平板涂抹法,每个菌种要求做 3 个稀释度,每个稀释度做3-4次重复,选取细菌和放线菌的菌落在20~-200之间的培养皿、真菌的菌落在 10-~100 的培养皿计数,并计算三次重复的平均值。每克干土中微生物数量计算式:
每克干土中菌落数=(菌落平均数×稀释倍数×100%)/(湿土质量×干土)
1, 细菌:牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏 3g、蛋白胨 5g、琼脂 18g、蒸馏水 1000 ml、pH 值 7.0-~7.2 。
2, 放线菌:改良高氏 1 号培养基:KNO3 1g,FeSO4·7H2O 0.01g,K2HPO4 0.5g,淀粉 20g,MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、琼脂 18g、3%重铬酸钾溶液 3.3ml、蒸馏水 1000ml、pH 值 7.2~-7.4
3,真菌:马丁氏培养基(虎红琼脂):蛋白胨 5g、KH2PO4 1g、MgSO4 0.5g、葡萄糖 10g、琼脂 18.5g、孟加拉红 0.033g、氯霉素 0.1g、蒸馏水 1000ml。
所有培养基需在湿热灭菌锅中121°C灭菌 20-~30min
以上土壤微生物测定方案仅供参考,可以查询专业公司进行检测。
Ⅲ 土壤微生物数量的测定方法
取一定重量的土壤,称取1g,置于100ml无菌水中,充分振荡,然后离心,取上清回液,就得到土壤浸出液(可以看做答土壤中的微生物全部转移至水中)。然后做梯度稀释,取一定稀释度的溶液,涂平板,培养后数菌落数,然后乘上稀释倍数,就可得到1g土壤中该微生物的数量。
例如,你在稀释10的7次方的平板上数出了15个菌落,则1g土壤中微生物数量为1.5×10的8次方个。
Ⅳ 测定微生物的生物量有哪些主要方法
圣才学习网为您解答:
1.直接计数测定 根据微生物种类,有血球计数板和细菌计数板;或者用电子计数器计数
2.比浊法 根据菌悬液的浓度在一定范围内与光密度成正比,可以用分光光度计测OD值,用OD值表示样品菌液浓度
3.核酸计数法 荧光定量PCR技术
4.活菌计数法 MPN和平板计数法
由于测定方法的限制,前几种计数结果不太准确,目前应用广泛的是第四种
对粪大肠菌群和光合细菌可用MPN,对其他微生物可用平板计数法